儿茶酚胺类神经质检测方法研究.pdfVIP

华中科技大掌同挤医学鹿 硪士研完生平业论文 儿茶酚胺类神经递质检测方法研究 研究生：刘明杰 导师：朱业湘 华中科技大学同济医学院环境医学研究所 摘 要 些交感神经元嗜铬细胞分泌的一类非常重要的神经递质，也是重要的激素物质。 儿茶酚胺在人体的心血管系统、神经系统、内分泌腺、肾脏、平滑肌等组织系统 的生理活动中起着广泛的调节作用，同时还影响人体的代谢。检测血浆、尿液中 的儿茶酚胺对于嗜铬细胞瘤、神经母细胞瘤、高血压、心衰、肾上腺髓质增生等 疾病的临床诊断具有重要意义，并且有助于甲亢、甲低、充血性心衰、糖尿病、 肾功能不全、低血糖症等疾病的诊断，对神经电生理等基础医学研究也具有重要 意义。目前常用的儿茶酚胺检测方法是放射酶学法、化学发光法、荧光法和高效 液相色谱法，由于样品前处理复杂和检测仪器灵敏度等的限制，在本地区没有建 立起快速稳定、可以满足临床诊断和基础研究需要的儿茶酚胺检测技术。 我们在综合国内外有关检测方法的基础上，通过优化设计，建立了可以满足 ?窳诊断和基础医学研究需要的儿茶酚胺衍生荧光测定法和高效液相色谱一电 化学检测法。主要研究内容包括以下两个方面： 1．衍生荧光分析法检测儿茶酚胺的研究 本研究主要包括两个方面的内容，一是样品提取纯化方法研究，二是最佳衍 生条件研究。我们比较了两种样品的提取和纯化方法，活化氧化铝和阳离子交换 树脂提取纯化法。研究发现氧化铝提取纯化儿茶酚胺的回收率要高于阳离子交换 树脂，稳定性也好于阳离子交换树脂，并且活化氧化铝提取纯化法省去了操作繁 杂的填充层析柱以及装柱、洗柱等操作过程，操作简便，缩短了分析时间。并从 华中韩技大拳一济巨学院 疆士研竞生牛业论文 吸附效率、分析时间、重复性三个方面对活化氧化铝提取纯化法中几种调节pH 8．6)作 值缓冲液的效果做了综合比较，选择TRIS／EDTA缓冲液(O．2mol／l，pH 为调节pH值缓冲液。我们从衍生反应的pH值、衍生试剂的用量、衍生反应的时 间、衍生反应终止液的选择几个方面对衍生过程进行研究，结果表明最佳的衍生 NaOH，蒸馏水lml，0．05mJ 操作过程是：在1．5ml样品中加入0．2ml的lmol／1 10分钟即可用荧光分光光度计进行测定。肾上腺素和去甲肾上腺素浓度在 平均回收率分别为92．5±4．23％和89．6±4．89％，可以很好地满足临床诊断和基 础医学研究的需要。 2．高效液相色谱一电化学检测器检测儿茶酚胺的研究 本研究主要包括两个方面的内容，一是最佳色谱分离条件的研究，二是最佳 色谱检测条件的研究。我们从色谱柱、流动相、流速和柱温的选择等方面对色谱 分离条件进行了研究，经过大量条件试验，选择VARIANBDS柱作为色谱柱，磷 温为30C。我们选择VARIANProstar370电化学检测器的检测电压为+0．65V， 研究了电化学检测器对高效液相色谱系统的特殊要求以及保证检测最大稳定性 的方法。肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺以及内标物在上述色谱分离和检测条 件下得到很好的分离而没有受到干扰，四者的保留时间分别为2．85、3．43、6．80 E； 4．08％和8．02％，肾上腺素、去甲肾上腺素和多巴胺的平均回收率分别为94．8 ±3．27％、93．5--+3．酾％和91．8+4．32％，成为满足临床诊断和基础医学研究需要 、／ 的常规检测方法N ’ L) 关键词：儿茶酚胺衍生荧光法高效液相色谱电化学检测器 华中科技夫掌属济匪掌院 磺士研竞生毕业论文 for Research