蛋白质组学研究相关技术及其在生物医学研究中的应用.pdfVIP

药 物 生 物 技 术 Pharmaceutical Biotechnology 2002，9(1)：1～11 · 专家论坛· 蛋白质组学研究相关技术及其在生物医学研究中的应用‘ 纪建国，茹炳根 北京大学生命科学学院，北京 100871) 摘 要 蛋白质组学是以生物体系整体蛋白质为研究对象的新的研究领域，重点介绍■蛋白质组学研究常 用技术方法及其在生物医学研究应用方面的进展； 关键词 蛋白质组学；技术；应用 中图分类号：Q51 文献标识码：A 文章编号：1005 8915(2002)o1—001 Ll 蛋白质组‘proteomae’是由澳大利亚博士后 Marc 需遵循严格的处理方法以避免蛋白质组成的任何定性或定 Wilkins于1994年首次创造的一十术语，它是指一十给定 量变化，保持蛋白质不被细胞中的蛋白酶降解，并且定量转 的细胞或有机体在一定的时间表达的所有蛋白质．这总的 移到分离装置中。 蛋白质的研究称为蛋白质组学‘pmteomi~’，包含了从蛋白 样品预先分级分离可使低含量表达蛋白质富集并得到 质鉴定技水，比如质谱和双向电泳，到任何相关的蛋白质表 分析。常用的方法包括电泳或色着预先分离，蛋白质的亲 述的定量测定l】q J。随着蛋白质双向聚丙烯酰胺凝腔电 和富集以及进行亚细胞分离。 泳分离技术的发展，各种质谱技术的完善及新型仪器的应 1 L 1 液相等电聚焦及膜电泳DS-斟 采用液相等电聚 用，以及网络化、系统化生物信息学的迅速苷及与应用．蛋 焦的方法可以将复杂的蛋自质混合物在一定的口H范围内 自质组学在自身相关技术如样品的制备，灵敏度、准确度、 进行分离 从而将蛋自质浓缩在相对较窄的pH范围内，另 重复性及高通量自动化方面取得了丰富的经验和较大的进 一 方面在第一向根据p1分离时可选用窄范围pH梯度胶， 展，许多新技术新方法应用于蛋白质组学研究，发明了许多 提高分辨辜。如 Hoehstraz~r投其台作者使用 RotoforTM 新的仪器设备，应用领域进一步扩大，广泛应用于生物学， (Bio-R甜)液体等电聚焦系统将血清样品预先分级。特别是 医学，药物研究，农业等领域，成为2L世纪基因组研究叉一 使低分子量的核蛋白预先浓缩富集拈 。Burggmf等用 重大研究领域[4-”J 本文就蛋白质组学研究相关技术的 Octopu (Dr Weber dmbH，Kirchheim Germany)渍相等 发展及其应用的进展．存在的问题及其发展趋势略作介绍。 电聚焦系统将细胞胞溶物分离为80 1、pj组分。通过IEF 纯化可将高表达量的蛋白质限制于其相应的pI范围内，使 1蛋白质组学研究的相关技术 大量的低含量的蛋白质得到分离L8】 蛋白质组学研究主要是揭示细胞或有机体中所有的蛋 膜电泳是另外一种形式的液相等电聚焦 。微量IEF 白质，研究其结构与功能，对细胞内蛋白质进行定量和作圉 系统能分离低至 100 样品 膜在系统中作为pH障碍， 展示，对生物学体系中数千种蛋白质的复杂的混合物进行 样品被捕获在等电膜之间。膜以IPG技术为基础，蹦不动 鉴定，而生物体系中各种蛋白质含量差别较大 而且随体系 的线性漂移进入聚丙烯酰胺凝肢介质内，在体系中作为 所处的环境呈现动态变化，溶解性各有不同，酸碱性．分子 “ pH屏障”，样品以与电场垂直的方向流过分级的Immobi 量等差异较大，因此需要采取不同的方法和技术进行研究， bn Ⅲ膜。大量样品的分离可采用IsoPHneTM系统(Hod 蛋白质组学研究中常常涉及的相关技术包括样品的处理技