HPLC测定夏桑菊颗粒中蒙花苷的含量论文.docVIP

　　HPLC测定夏桑菊颗粒中蒙花苷的含量论文 黄晓文，谢艳婷，冯嘉欣，谢銮凤 【摘要】 目的 建立夏桑菊颗粒中蒙花苷的测定方法。方法 采用反相高效液相色谱法，色谱柱：DiamonsilTMC18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm，迪马公司）；流动相为甲醇四氢呋喃水(43∶5∶52),检测波长334 nm，流速1.0 mL·min-1.freelg，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得质量浓度为47.95 μg·mL-1的蒙花苷对照品贮备液。精密量取3.0 mL，置10 mL容量瓶，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（质量浓度为14.39 μg·mL-1）。 2.1.2 供试品溶液 取装量差异项下的本品，研细，取5 g，精密称定，加水45 mL使溶解，用以水饱和的正丁醇提取 3次，每次正丁醇的用量分别为25、20、20 mL，合并正丁醇液；用以正丁醇饱和的水20 mL洗涤，洗涤后的水层用以水饱和的20 mL正丁醇提取,合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，移至25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 2.1.3 阴性对照液 取处方中除野菊花外的其余成分制成不含野菊花的阴性对照品，按“2.1.2”项下的方法制备野菊花阴性对照溶液。 2.2 色谱条件及系统适应性试验 色谱柱：DiamonsilTM C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm，迪马公司）；流动相∶甲醇四氢呋喃水(体积比43∶5∶52)；流速：1.0 mL·min-1；检测波长334 nm；柱温为30 ℃。分别取蒙花苷对照品溶液、供试品溶液和野菊花阴性对照溶液各20 μL，按上述色谱条件，注入色谱仪。蒙花苷与样品中相邻色谱峰的分离度大于2.0,理论板数以蒙花苷计算应不低于2 500,阴性对照没有干扰。蒙花苷对照品、供试品溶液及阴性对照溶液的色谱图见图1、2、3。 2.3 方法学考察 2.3.1 线性关系考察 精密吸取0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL的蒙花苷对照品贮备液，置10 mL的容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，得质量浓度分别为2.40、4.80、9.59、19.18、28.77、38.36、47.95 μg· mL-1的系列对照品溶液。吸取上述系列对照品溶液各20 μL，分别进样测定，以峰面积（A）对溶液的质量浓度（ρ）进行回归，得回归方程A=43690ρ-5780，r=0.999 9，表明蒙花苷在0.048～0.959 μg之间与峰面积线性关系良好。 2.3.2 精密度试验 取蒙花苷对照溶液20 μL，注入色谱仪，连续测定6次，记录峰面积，结果蒙花苷峰面积的平均值为607 366，RSD为0.40%,表明仪器精密度良好。 2.3.3 重复性试验 取同一批号（批号DA11008）的样品6份，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，进样测定，6次测定结果的RSD为1.44%，表明本方法重复性好。 2.3.4 稳定性试验 取同一供试品溶液（批号DA11008），分别在0、2、4、8、12、24 h进样20 μL，结果峰面积RSD为0.82%，表明供试品溶液在24 h内稳定。 2.3.5 加样回收试验 取已知含量（批号DA11008）的样品粉末约2.5 g，共6份，分别精密加入蒙花苷对照品贮备液（质量浓度为47.95 μg·mL-1）4.2 mL，按“2.1.2”项下方法制备溶液，按上述色谱条件下进样20 μL,测定，结果蒙花苷平均回收率为100.7%，RSD为0.86%，结果表明本方法准确可靠。结果见表1。表1 蒙花苷回收率试验结果（略） 2.4 样品测定 取夏桑菊颗粒样品3批，照“2.1.2”项下方法制备供试品溶液。取蒙花苷对照品溶液与供试品溶液各20 μL，注入色谱仪，测定，计算蒙花苷的含量。结果3批样品（批号DA11008、DA10788、DA10963）所测得的含量分别为0.929、0.897、0.706 mg.袋-1，RSD分别为0.5%、1.3%和1.1%（n=3）。 3 讨 论 3.1 蒙花苷提取方法的选择 分别考察了正丁醇萃取、甲醇回流、甲醇超声处理60 min等提取方法的提取效率，结果测得供试品（批号DA11008）中蒙花苷的含量分别为0.929、0.856、0.914 mg·袋-1，表明用正丁醇萃取时含量最高，且其他成分的干扰少, 蒙花苷与其他成分完全分离。 同时考察了正丁醇萃取的次数，分别将每次提取的正丁醇液蒸干后用甲醇定容至25 mL，进样测定，萃取1～4次制得的供试品溶液中蒙花苷的含量分别为353.4、52.9、8.6 μg和未检出；考察了以正丁醇提取以正丁醇饱和的水洗涤液的次数，结果提取1～2次的供试