生物技术制药_04-动物细胞工程制药.ppt

生 物 技 术 制 药Biotechnological Pharmaceutics 第四课 动物细胞工程制药 动物细胞工程制药 主要内容 动物细胞的结构和生理特性 动物细胞工程的常用操作技术 动物细胞工程制药过程 动物细胞工程制药实例 要求 掌握动物细胞培养技术的要点 通过具体实例掌握动物细胞工程制药的过程 动物细胞工程制药 动物细胞的结构 动物细胞形态 动物细胞工程制药 动物细胞的结构 质膜（plasma membrane） 细胞的屏障、细胞内外物质交换的通道，具有流动性 细胞质（cytoplasm） 非均质，含有大量的细胞器 细胞核（nucleus） 遗传物质的储存地，含细胞的全套遗传信息 胞外基质（extracellular matrix） 存在于细胞间的大分子结构，以多糖及糖蛋白为主 动物细胞没有细胞壁！ 动物细胞工程制药 动物细胞的生理特性 细胞的全能性（totipotency） 分化的细胞保留着全部的核基因组，具有全套遗传信息，具有发育成完整个体的潜能 证明：克隆羊 Dolly 的诞生 细胞分化（differentiation） 细胞在形态、结构和功能上发生差异的过程 时间上：一个细胞在不同发育阶段可以形成不同的形态和功能 空间上：一个细胞在所处环境或部位不同可以形成不同的形态和功能 组织和器官的形成 动物细胞工程制药 动物细胞的生理特性 细胞的衰老和凋亡 细胞衰老（senescence） 细胞增殖能力逐渐减弱 衰老与染色体端粒的缩短有关 细胞坏死（necrisis） 细胞受到外界物理、化学因素的损伤而引起的死亡 细胞解体，炎症反应 细胞凋亡（apoptosis） “程序性细胞死亡”，即细胞外信号诱发的细胞自杀程序 凋亡的意义：保证个体的正常生长、发育和维持生理功能 动物细胞工程制药 动物细胞工程的常用操作技术 细胞工程（cell engineering） 利用细胞生物学和分子生物学等方法，有目的地利用或改造生物遗传性状，以获得特定的细胞产品、药品或新型物种的综合技术体系 细胞培养、组织培养及其放大 细胞融合育种 细胞核移植与克隆 染色体工程 干细胞工程 动物细胞工程制药 动物细胞工程的常用操作技术 动物细胞融合（cell fusion）技术 细胞核移植（nuclear transfer）技术 动物细胞培养（cell culture）技术 动物细胞工程制药 动物细胞融合技术 把两个或多个真核细胞合并成为一个双核或多核细胞 融合过程 Step 1：细胞相互接触 Step 2：细胞质膜的融合 Step 3：细胞质的重组 Step 4：细胞核的重组和遗传物质的合并、选择 同核体 基因型相同的细胞融合而得的多核细胞 异核体 由不同基因型的细胞融合而得的多核细胞（杂种细胞），存活下来的细胞可分裂成两个合核体（单核杂种细胞） 动物细胞工程制药 动物细胞融合技术 细胞质膜的流动性是细胞融合的生物学基础 动物细胞工程制药 动物细胞融合技术 融合方法 (1)：仙台病毒诱导法 仙台病毒（sendai virus）又名日本血凝病毒（HVJ），是RNA 病毒，其包膜上有很多刺突 HVJ 磷脂外衣与细胞质膜相似，因此能与动物细胞质膜直接融合，如果 HVJ 同时接触到两个细胞就会打破细胞质膜的隔阂，引起两个细胞的融合 HVJ 诱导细胞融合的能力与其核酸无关，可以用 UV 照射 HVJ，破坏其核酸，使其失去感染能力 需大量培养病毒，再灭活，存在感染风险，目前已少用 动物细胞工程制药 动物细胞融合技术 融合方法 (1)：仙台病毒诱导法操作 两种细胞在一起培养，加入 HVJ 病毒，在 4 oC 条件下，使足够量的病毒颗粒附着在细胞膜上，并使细胞相互聚集 在 37 oC 下温育，病毒包膜与细胞膜发生作用，细胞质膜受到破坏，此时需要 Ca2+ 和 Mg2+，最适 pH 为 8.0～8.2 细胞质膜连接部穿通，细胞质相互渗透，HVJ 也随之进入细胞质 周边连接部修复，此时需 Ca2+ 和 ATP 供能 融合成新的细胞，仍需 ATP 参与供能 动物细胞工程制药 动物细胞融合技术 融合方法 (2)：聚乙二醇（PEG）诱导融合 常用的 PEG 相对分子质量为 200～20,000 原理：PEG 分子具有轻微的负极性，能与具有正极性基团的水、蛋白质和碳水化合物等形成氢键，从而在质膜之间形成分子桥，使细胞质膜发生粘连，促使质膜的融合 PEG 能增加类脂膜的流动性，也使细胞的核、细胞器发生融合成为可能 不受物种限制，融合率较高，异种细胞融合率 10～35% PEG 对细胞具有一定毒害作用 动物