荔枝种子可溶性贮藏蛋白质的特点.pdfVIP

第28卷 第4期 热 带 作 物 学 报 Vo1．28 No．4 2Oo7年 12月 CHINESE JOURNAL OF TROPICAL CR0PS Dec．2OO7 荔枝种子可溶性贮藏蛋白质的特点 张 华 陈月异 史敏晶 田维敏 热带作物栽培生理学重点开放实验室暑 摹 篱鑫蠢霎海南儋州571737 陌 ‘ 摘 要 采用蛋白质组织化学染色、SDS—PAGE、双向电泳、蛋白质免疫印迹和间接免疫荧光定位等细胞学和 生物化学的技术，分离鉴定荔枝种子中可溶性贮藏蛋白质。荔枝种子富含贮藏蛋白质，积累在子叶和胚乳薄 壁细胞的蛋白体里。22l(Il蛋白质是种子的一种可溶性贮藏蛋白质，为幼苗生长所需氮素的重要来源。该蛋白 质与22l(Il营养贮藏蛋白质有免疫相关性，而且，两者的双向电泳图谱非常相似，表明它们具有较高同源性。 由于荔枝22l(Il营养贮藏蛋白质具有胰蛋白酶抑制剂活性，所以，其同源物积累在种子中可能有抗虫作用。 关键词 荔枝 种子 营养贮藏蛋白质 种子贮藏蛋白质 营养贮藏蛋白质同源物 中图分类号 $667．1 Q946．1 营养贮藏蛋白质具有3个特点：积累在液泡中，相对含量高，在植物旺盛生长发育阶段明显消失【 。 树木营养贮藏蛋白质对树木生长发育有重要调节作用。对于营养贮藏蛋白质丰富型树种，树木的生长 优先利用营养贮藏蛋白质【 ，对于营养贮藏蛋白质贫乏型树种，体内的贮藏氮化物对于新梢生长的贡献 也是最大的【引。另一方面，由于不同类群树木的营养贮藏蛋白质在细胞学和生化性质方面具有多样性， 加之草本植物的营养贮藏蛋白质一般都是有生物活性的【 ”，因此，树木营养贮藏蛋白质可能还具有某 些特殊的生物学功能【 】。在草本植物中，营养贮藏蛋白质与种子贮藏蛋白质是两类不同的蛋白质【 。但 是Beardmore等发现杨树的种子中存在其营养贮藏蛋白质的同源物【n】。所以，木本植物的种子中是否普 遍存在其营养贮藏蛋白质的同源物是一个值得研究的问题。荔枝营养器官中积累一种22 l(u贮藏蛋白 质，该蛋白质具有胰蛋白酶抑制剂活性。笔者采用可溶性蛋白质提取技术，从荔枝的种子中分离鉴定了 一 种分子量约22 l(u的可溶性贮藏蛋白质，证明该蛋白质是22 l(u营养贮藏蛋白质的同源物，推测该蛋 白质对于增强种子的抗虫性具有重要作用。 1 材料与方法 1．1 材 料 枝条和种子样品采自生长在华南热带农业大学校园内的荔枝树(Litchi chinensis Soma．)。300粒种子 播种于砂床，在种子萌芽(露出胚根)、幼茎迅速伸长(幼叶未展开)、幼叶叶色为古铜色、淡绿色和顶芽 稳定期时采集种子和幼苗的茎。每个时期取5株，茎和种分开，一部分样品用于细胞学观察，一部分用 于生化分析。 1-2 种子可溶性蛋白提取和SDS—PAGE 采用提取营养贮藏蛋白质的提取液的方法提取种子可溶性蛋白质。蛋白质提取及SDS．PAGE参照 田维敏等的方法【 。粗蛋白用体积分数80％的丙酮纯化。用Bradford法测定蛋白质含量【H】。蛋白质样品 用于SDS—PAGE和双向电泳。SDS—PAGE采用不连续缓冲系统，分离胶浓度 l2％，电极缓冲液为 0．025 moi／L Tris，0．019 2 moi／L甘氨酸，0．1％SDS，pH8．3。浓缩胶稳流15 mA，分离胶稳流20 mA。每一 泳道上样量为20 g总蛋白质。凝胶用考马斯亮兰R250染色。 国家自然科学基金资助项目(批准号 张 华 男，1978年生，硕士。电话：0898E-maih 54yalao@163．tom ‘通讯作者，1965年生，男，博士，教授，博士生导师。研究方向：植物发育生物学。电话：0898E-mail：wmtian@163．tom 收稿日期：2007—01—23 修回日期：2007—04—03 22 热 带 作 物 学 报 28卷 1．3 多克隆抗体制备 本研究所用的一抗为22 l(u营养贮藏蛋白质的多克隆抗体。通过制备性SDS—PAGE从荔枝枝条树 皮可溶性蛋白质中纯化22 l(u营养贮藏蛋白质。凝