蚁附蠲痹颗粒对AA大鼠关节滑膜组织形态和外周血T细胞亚群影响实验研究.docx

成都中医药大学硕士学位论文　附件 4声明硕士学位论文蚁附蠲痹颗粒对 AA大鼠关节滑膜组织形态和外周血 T细胞亚群影响的实验研究是本人在成都中医药大学攻读硕士学位期间在导师指导下完成的，该论文涉及的知识产权归成都中医药大学所有。有关该学位论文成果的开发、转让、发表等，均需征得导师和成都中医药大学同意。硕士生签名：导师签名：2007年 5月 10日　６６成都中医药大学硕士学位论文　引言类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种病因不明的自身免疫性疾病，主要表现为对称性、慢性、进行性多关节炎。关节滑膜的慢性炎症、增生形成血管翳，侵犯关节软骨、软骨下骨、韧带和肌腱等，造成关节软骨、骨和关节囊破坏，最终导致关节畸形和功能丧失；在关节病变的同时往往还同时存在关节外病变（皮下结节、心包炎、胸膜炎、肺炎、周围神经炎等）。RA在临床非常常见，据西方国家报道，患病率为 0.2％～5.3％[1]；在我国患病率约为 0.32％～0.36%[2]。RA可以发生在任何年龄，与性别密切相关，随着年龄增长发病率也随之增高，女性高发年龄为 45～55岁，女性约为男性的 3倍。RA因其发病率高，损害严重、波及范围广、易反复发作和致残率高给人民群众的健康造成了极大的危害。RA的发病机制复杂，目前仍没有完全阐明，现在多认为 RA是一种全身性 T细胞构成和功能紊乱导致的以关节滑膜损伤为主要表现的自身免疫性疾病，基本的病理改变为关节滑膜的慢性炎症。T细胞在 RA的发生和发展中起着关键作用，尤其是 CD4+T细胞参与了 RA的激发和延续，国内外研究结果表明 RA患者由于存在着 CD4+T细胞数量的增加和 CD8+T细胞数量的下降，从而使 CD4+/CD8+比值上升，Th细胞功能相对亢进，Ts细胞功能相对减弱，导致 B细胞功能亢进和免疫球蛋白表达失控[3,4]。针对 RA的以上特点，医药工作者对 RA进行了许多现代研究，提出了许多新疗法，开发出了许多新药物，但是该病至今仍无根治方法和药物，并且由于治疗药物的毒副作用，致使许多患者被迫中途停药，而很难取得理想效果。中医药治疗 RA有一千多年的历史，并且具有简、便、验、廉和毒副作用小等优点。因此深入开展中医药治疗 RA研究工作，研制开发治疗 RA的高效、低毒新药成为医药工作者的一项迫切任务。蚁附蠲痹颗粒是导师彭玉华教授根据临床经验制定的自拟处方，而且临床应用和前期的药效学研究都证实该处方具有较好的效果[5]。基于以上背景我们设计了本课题，希望通过观察蚁附蠲痹颗粒对佐剂性关节炎（Adjuvont Arthritis，AA）大鼠关节滑膜的组织形态学和外周血 T细胞亚群的影响，来为蚁附蠲痹颗粒治疗 RA提供组织形态学证据并探讨其可能的作用机制，为进一步开发治疗 RA的新药提供理论依据。　７成都中医药大学硕士学位论文　实验研究　1蚁附蠲痹颗粒对 AA大鼠滑膜组织形态学的影响1.1目的观察蚁附蠲痹颗粒对 AA大鼠关节滑膜组织形态的影响。1.2材料1.2.1药物与试剂①蚁附蠲痹颗粒(简称颗粒）由蚂蚁、盐附子、三七等中药组成，由成都中医药大学中药制剂教研室制成颗粒剂，每 g含原生药 6g；②雷公藤多甙片,10mg，湖南协力药业有限公司生产,批号③弗氏完全佐剂(FCA)(Sigma公司产品)；③生理盐水：四川科伦药业股份有限公司，批号：国药准字 1.2.2主要仪器①显微镜 BH-2，Olympus；②BMJ-III型包埋机，常州中威电子仪器厂；③LEICARM2235切片机，德国。1.2.3实验动物健康 SD大鼠 60只，SPF级，雄性，体重 200±20ｇ，由四川省医学科学院实验动物研究所提供，实验动物合格证号为：SCXK（川）2006-16。1.3实验条件成都中医药大学药理实验室；成都中医药大学病理教研室。1.4方法1.4.1分组方法　60只 SD大鼠按体重分层后随机分为 6组，即正常对照组(空白组)、模型对照组(模型组)、雷公藤阳性对照组(阳性组)、蚁附蠲痹颗粒高剂量组（高剂量组）、　８成都中医药大学硕士学位论文　蚁附蠲痹颗粒中剂量（中剂量组）和蚁附蠲痹颗粒低剂量组（低剂量组），每组10只，每天一次灌胃给药。除正常组外的各组大鼠均按造模方法造模。1.4.2造模方法　用弗氏完全佐剂于造模鼠右后足趾皮下进针至踝关节，注射弗氏佐剂 0.1ml/只诱导关节炎的发生[6]。1.4.3给药方法　正常组和模型组灌胃等体积的生理盐水；各给药组根据给药量不同，把药物配成不同浓度等体积的混悬液，灌胃给药。蚁附蠲痹颗粒低剂量组：6.3g/(kg?d)，相当于成人日用量的 3.5倍；蚁附蠲痹颗粒中剂量组：12.6g/(kg?d)，相当于成人日用量的 7倍；蚁附蠲痹颗粒高剂量组：25.2g/(kg?