转基因橡胶树中载体骨架序列的初步研究.pdfVIP

热带作物学报 2014，35(2)：282—288 ChineseJournalofTrooicalCro 转基因橡胶树中载体骨架序列的初步研究 李 季，黄天带，蔡海滨，华玉伟，黄华孙 农裹业部橡裘胶树生物学与遗传资源蔫利用重篁点磊实验室海南田 ¨571737 摘 要 以橡胶树转基因材料为研究对象 ，首次基于载体左右边界序列设计的特异引物进行载体骨架序列的初 步 PCR检测 ，结果表明，15个转基因阳性株系中有 5个和 2个株系分别含有左侧和右侧 的边界序列． 占33．3％ 和 13．3％，结合这些株系PCR产物的序列分析结果进一步证实除T—DNA区以外的载体骨架序列确实整合到这 些株系的植物基 因组 中。同时对载体骨架序列存在的弊端及可能的解决途径做 了相应 的分析 关键词 橡胶树：转基因：载体骨架序列：PCR 中图分类号 $794．1 文献标识码 A ThePreliminary Study ofT-DNA VectorBackboneSequences iU TransfomantsofHevea brasifiensis LIJi，HUANG Tiandai，CAIHaibin，HUA Yuwei，HUANG HuasHn RubberResearchInstitute，ChineseAcademyofTropicalAgriculturalSciences／StateKeyLaboratory BreedingBaseof Cultivation＆PhysiologyofTropicalCrops．Danzhou,Hainan571737,China Abstract TransgenicHevea plantswerescreened by PCR analysisforthepresenceofvectorbackbone sequences forthefirsttime．In 15 positivelines，the numberoflineswith left-bordersequenceswas5 ． and2 linescontained right-bordersequenceswhichwerealsowith the left T—DNA border．Combiningwith the sequencesanalysisof transformants itindicated thattheintegrationofvectorbackbone sequencesnotbelonging to T—DNA had occurred in A， 6(把矗 ，n—mediated transformation further．In this study，the meanings of vector backbone sequences eliminationand thepossiblewaystoresolvethisproblem werealSOanalyzed． Key words Heveabrasiliensis；Transformation；Veetorbackbone sequences；PCR doi 10．3969／j．issn．1000—2561．2014．02．013 传统观点普遍认为在遗传转化过程 中．T—DNA 橡胶树转基因起步相对较晚．目前大多数的研 边界之外的载体序列或载体骨架序列(vectorbackbone 究主要集 中在遗传转化过程的优化、目的基因的整 secu『ences)不可能转移至宿主植物细胞 中l_【，然而， 合及表达情况等方面．对于载体骨架序列的发现及 针对多种物种的转基因整合模式的研究结果表明． 其整合现象还未见相关的研究报道 T—DNA区域 以外的载体骨架序列经常插入到植物 本研究在对橡胶树转基因植株进行阳性鉴定的 基因组中[241不过有关骨架序列的整合机制还有