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内瘘术后狭窄的机制研究 上海交通大学医学院附属仁济医院 血管外科 吕 磊 概况 血透通路是血透患者的生命线 建立血透通路主要方式：AVF AVG 失功发生率较高 失功的原因很多 Neointima formation causes the failure of 60% of AVFs within 2 years. Increasing arteriovenous fistulas in hemodialysis patients: Problems and solutions. Kinfney Int 62: 1109-1124,2002 内瘘吻合口静脉段狭窄，迄今为止仍无有效的防治方法 概况 基础研究 从机制上找到发生内膜增生导致AVF吻合口静脉段狭窄的原因 概况 但是，AVF基础研究远远不够 概况 α-平滑肌肌动蛋白表达增加，平滑肌细胞、成纤维细胞增生；胞外基质成分增多；内膜及外膜新生血管形成；炎性细胞、细胞调节蛋白及细胞因子参与等，是导致内膜增生的主要机制。内皮损伤则是导致内膜增生的始动因素。 血流动力学改变 血流剪切应力（shear stress，SS） 局部SS与静脉内膜增厚密切相关。稳定的层流切应力有利于血管内皮细胞正常功能。非层流，过高、过低切应力导致血管内皮功能紊乱。 AVF/AVG术后，吻合口及静脉段血流动力学发生巨大变化。 血流动力学改变 SS对动静脉塑形的作用 SS A/V 扩张 SS NH SS NH 通过研究小鼠动静脉瘘模型，发现内膜增生主要发生在吻合口和近端吻合口静脉外侧壁上。 Neointima lesions associated with arteriovenous fistulas in a mouse model. Kidney Int.? Castier?Y1,?Lehoux S,?Hu Y,?Foteinos G,?Tedgui A,?Xu Q. Characterization 2006 Jul;70(2):315-20. 血流动力学改变 SS研究方法 1.动物模型 2.体外模拟：平行平板流室系统（Parallel plate flow chamber） 内皮细胞功能改变 内皮细胞：强大的受体效应细胞，接受各种物理化学刺激后能释放各种活性物质以维持血管的动态平衡，其中NO对其自身的生理功能起重要作用。 损伤 炎症 增殖 迁移 NH 凋亡 衰老 氧化应激 其他因素 尿毒症的影响 尿毒症患者血管内皮功能受损，易发生动脉硬化和内膜增生。 动脉平滑肌细胞、成纤维细胞，炎症细胞，细胞外基质等。 长期处于微炎症状态 我们的工作 研究一:血透患者自体动静脉内瘘狭窄相关miRNA表达谱分析及靶基因鉴定 实验组标本来源于12月～24月不等的自体动静脉瘘狭窄的患者，于动静脉瘘重建术中取吻合口静脉端2cm以内的内膜增厚的静脉(n=12, group 1)。 对照组标本是尿毒症患者初建动静脉瘘时正常静脉(n=8, group 2)。 标本于术中取下后置入液氮中，保存于-80℃冰箱中。 Lv L, Huang W, Zhang J, Shi Y, Zhang L. Altered microRNA expression in stenoses of native arteriovenous fistulas in hemodialysis patients. J Vasc Surg 2016 Apr;63(4):1034-1043.e3. 研究一 RNA提取，miRNA基因芯片检测及分析 Realtime RT-PCR验证miRNA表达 靶基因预测，生物信息学分析（ GO ， KEGG ） Prediction of target genes Microcosm Targets Version 5 Miranda Targetscan version 6.2 研究一 MiRNA差异表达谱 研究一 miRNA芯片检测结果 总共有23个miRNA上调，35个miRNA下调，我们选取表达差异最为显著的6个miRNA进行进