lass2tmsg1基因沉默对人肺癌95c细胞侵袭迁移的影响极其机制研究-study on the effect of las s2 tmsg 1 gene silencing on invasion and migration of human lung cancer 95c cells and its mechanism.docxVIP

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2018-05-28 发布于上海
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lass2tmsg1基因沉默对人肺癌95c细胞侵袭迁移的影响极其机制研究-study on the effect of las s2 tmsg 1 gene silencing on invasion and migration of human lung cancer 95c cells and its mechanism.docx

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lass2tmsg1基因沉默对人肺癌95c细胞侵袭迁移的影响极其机制研究-study on the effect of las s2 tmsg 1 gene silencing on invasion and migration of human lung cancer 95c cells and its mechanism

目录中文摘要‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥（1）英文摘要‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥（2）前言‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥（4）第一部分 RNA 沉默 LASS2/TMSG-1 基因对人肺癌细胞生物学功能的影响‥‥（5）实验材料与方法‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥（5）结果‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥（16）讨论‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥（20）结论‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥（22）第二部分 LASS2/TMSG-1 基因机制的初步探讨‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥（22）实验材料与方法‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥（22）结果‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥（28）讨论‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥（31）结论‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥（34）参考文献‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥（34）文献综述‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥（39）缩略语表‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥（53）攻读学位期间发表文章情况‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥（54）个人简历‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥（55）致谢‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥（56）中文摘要目的：研究沉默 LASS2/TMSG-1 基因对人肺癌细胞系低转移潜能亚系 95C 的体外侵袭迁移能力的影响及相关机制；初步探讨 LASS2/TMSG-1 基因的机制。方法：采用半定量 RT-PCR、Western blot 来检测 LASS2/TMSG-1 在人不同转移潜能肺癌细胞系 95C(低转移潜能 )和 95D(高转移潜能 )中的表达情况。运用脂质体转染法将靶向沉默 LASS2/TMSG-1 基因的 Psilencer2.1-U6/TMSG-1shRNA 转染 95C 细胞；应用体外侵袭实验、迁移实验检测细胞侵袭与迁移能力的变化；利用 Western blot 检测 LASS2/TMSG-1、ATP6L、MMP-2、MMP-9 在细胞中的表达水平；使用比色法检测细胞中 V-ATPase 的活性；使用 BCECF 与 BCECF-AM 氢离子敏感探针检测细胞内外氢离子浓度的变化；采用明胶酶谱实验检测细胞培养液中 MMP-2 和 MMP-9 的活性。统计学分析采用 SPSS17.0 统计软件，P＜0.05 认为差别有显著性。结果：LASS2/TMSG-1 在 95C 细胞系中的 mRNA 及蛋白表达量均明显高于在 95D 细胞系中的表达, 具有统计学意义 (P0.05)。体外侵袭实验、迁移实验显示 95C 细胞的侵袭与迁移能力显著增强（P＜0.05）；通过 RT-PCR 和 Western blot，发现 shRNA 可显著抑制 95C 细胞 LASS2/TMSG-1 基因 mRNA 和蛋白水平的表达，沉默组细胞的 V-ATPase 活性和转运氢离子的能力增强，与其他两组相较有统计学意义（P＜0.05）；MMP-2、MMP-9 蛋白的表达和活性升高（P＜0.05）。结论：LASS2/TMSG-1 在低转移潜能肺癌细胞系中的表达明显高于在高转移潜能肺癌细胞系中的表达,推测它是一种肿瘤转移抑制基因。沉默 LASS2/TMSG-1 基因表达后,V-ATPase 质子泵中关键性 C 亚基（ATP6L）的表达上升,且基因沉默后其细胞内 H＋浓度下降、细胞外 H＋浓度上升、V-ATPase 活性增强，均提示 LASS2/TMSG-1 可以通过结合 ATP6L 亚基抑制 V-ATPase 活性，影响 MMP-2、MMP-9 的表达与活性，从而改变肿瘤细胞的生物学行为。关键词：LASS2/TMSG-1，液泡型 ATPase，基质金属蛋白酶，肿瘤转移AbstractObjective: To explore the effect of sliencing LASS2/TMSG-1 on the invasion and migration of 95C (a human lung carcinoma cell line with low metastatic potential) and its molecular mechanisms. To make a preliminary discussion on the mechanism of