技术原理及常见问题分析2014课件.pptxVIP

Western blot 技术原理及常见问题分析东胜创新 科学仪器部2014.7Western Blot简介及原理Western Blot一般流程Western Blot常见问题分析Western Blot 简介：印迹法（blotting）是指将样品转移到固相载体上，而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法。1975年，Southern将DNA转移到硝酸纤维素膜（NC膜）上，并利用DNA－RNA杂交检测特定的DNA片段，称为Southern印迹法。而后人们用类似的方法，对RNA和蛋白质进行印迹分析，对RNA的印迹分析称为Northern印迹法，对单向电泳后的蛋白质分子的印迹分析称为Western印迹法，对双向电泳后蛋白质分子的印迹分析称为Eastern印迹法。Western Blot 基本原理Western Blot 优点 高分辨率的电泳技术 特异敏感的抗原-抗体反应 1-5ng中等大小的靶蛋白Western Blot应用目的蛋白的表达特性分析目的蛋白与其它蛋白的互作目的蛋白的组织定位目的蛋白的表达量分析蛋白表达分析-定性两种蛋白（47kDa和55kDa)的诱导表达分析 诱导剂：Q23和Q70 温度：33℃和39℃ 时间：7天、14天、21天蛋白表达分析-相对定量示例1示例2蛋白表达分析-绝对定量蛋白相互作用研究IP: anti-proBNo IPproAproBproAWB: