Mg2对兔脑继发性脑损伤中细胞凋亡影响实验研究.docVIP

Mg2对兔脑继发性脑损伤中细胞凋亡影响实验研究 　　[摘要] 目的 探讨Mg2+对兔脑继发性脑损伤中细胞凋亡影响的实验情况。 方法 选择新西兰大白兔50只，随机分为实验组、对照组和假手术组，实验组及对照组各20只，假手术组10只；实验组及对照组动物在脑外伤后早期静脉使用硫酸镁后，通过对挫伤灶周围脑组织的病理学检查、透视电镜检查及细胞调亡的检测，分析镁离子对脑继发性损害中细胞调亡的影响。 结果 对照组脑损伤6 h后，组织病理学显示损伤病灶出血、组织间隙增宽、周围细胞水肿，脑损伤后48 h最为显著，损伤病灶内出现胞膜结构完整、细胞核固缩深染的神经细胞，即神经细胞凋亡，凋亡细胞相对密集；实验组神经细胞变性坏死较少、脑水肿较轻，两侧病变差异不显著；正常脑组织内TUNEL阳性细胞表达较少，损伤6 h的标本出现TUNEL散在少量阳性细胞，两组标本中的TUNEL阳性细胞数量随着损伤时间的延长而逐渐增加，峰期为24 h，实验组各时段的TUNEL阳性细胞显著低于同时段的对照组，差异有统计学意义（P0.05）。 结论 镁离子可降低兔脑继发性脑损伤中神经细胞凋亡数量，对脑损伤神经细胞起到保护作用。 　　[关键词] 实验研究；细胞凋亡；继发性脑损伤；镁离子 　　[中图分类号] R743.34 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2014）35-0005-03 　　脑外伤是一种引起外伤性死亡和残疾的全球主要公共卫生问题之一，在深圳宝安区，脑外伤的致死和致残率在所有外伤性疾病中所占比例一直居高不下[1]。由于原发性脑损伤后常常伴有继发性脑损害，此类患者即使存活，但意识、语言、肢体的感觉及运动功能往往留下不同程度的障碍，甚至成为植物人，给个人和社会都带来了一系列不利的影响，加重了社会负担[2]。本课题通过动物实验验证Mg2+是否通过抑制脑外伤后继发性脑损害中细胞凋亡的发生，从而保护病灶周围神经细胞免受进一步损害，分析其可能的作用机制并指导临床应用，效果满意，现报道如下。 　　1材料与方法 　　1.1实验动物 　　健康成年新西兰大白兔50只，体重500～750 g，雄兔与雌兔各25只，由本实验动物中心代为饲养。 　　1.2实验仪器 　　日本SANYO超低温冰箱、LEICA CM1900低温恒冷冰冻切片机、武汉千屏影像技术有限责任公司生产的HPIAS-1000PD高清晰度彩色病理图文分析系统、美国Labconco freeze dry system、上海嘉鹏科技有限公司生产的TGL-16G-A型高速冷冻离心机、德国ZEISS正置全自动荧光显微镜、北京中仪光科科技发展有限公司生产的OLYMPUS生物显微镜BX53、北京中西远大科技有限公司生产的SA2-WDP-350型电热恒温箱。 　　1.3药物与试剂 　　德国Bocshringcr Mannhcim 公司提供TUNEL染色试剂盒；甘露醇注射液（国药准字江西制药有限责任公司）；硫酸镁注射液（国药准字河北天成药业股份有限公司）。 　　1.4 实验方法 　　（1）动物分组及模型制作：新西兰大白兔50只，随机分成实验组、对照组和假手术组，实验组及对照组各20只，假手术组10只。用1%戊巴比妥钠50 mg/Kg腹腔麻醉后，在兔右侧颅顶部用牙科钻开一直径为1.5 cm的骨窗，注意保持硬脑膜完整，按文献采用自由落体法造成右顶叶较为一致的脑挫裂伤，冲击力为50 g×15 cm；假手术组只开放骨窗，不给予打击。对照组于术后常规使用20%甘露醇静滴，实验组除使用20%甘露醇外，于术后30 min开始静注硫酸镁0.5 g（4 mmol），然后将2 g（16 mmol）硫酸镁稀释至250 mL于24 h内缓慢静滴。连用3 d。（2）取材与处理：根据分组方法分别在伤后12 h、24 h和48 h处死。采用同上麻醉方法麻醉后，断头取脑，切取伤灶及其周边脑组织，分别做病理学观察、透视电镜观察及TUNEL细胞凋亡检测。 　　1.5病理学判断及评估标准 　　（1）末端脱氧核糖核酸转移酶介导的生物素脱氧尿嘧啶核苷酸缺口末端标记法（TDT Mcdiatcd Biotin dUTP Nick End Labcling，TUNEL）结果评估：400高倍光学显微镜下，每张切片任选5个视野，计算阳性细胞的平均数；（2）石蜡切片的苏木素-伊红（Hcmatoxylin and cosin HE）染色结果评估：正常细胞核胞浆呈粉红色或红色，正常细胞核呈蓝色[3]。 　　1.6统计学分析 　　采用SPSS17.0统计学软件分析所有数据，计量资料数据采用均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用t检验，不同时点计量资料比较采用方差分析，P0.05为差异有统计学意义。 　　2