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“基因工程”专题复习指津 　　【高考回眸】 　　作为现代生物科技的核心内容，基因工程部分的内容每年高考定有涉及。分析近年来各地高考试题不难看出，这部分的考点相对集中在以下方面：基因工程中的各种工具，尤其是各种工具酶的切割位点的确定，获取目的基因的方法，基因表达载体的构建及导入，目的基因的筛选方法等。 　　【要点呈现】 　　一、基因工程的概念 　　基因工程就是按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 　　可以从以下方面全面把握基因工程概念。 　　别名：基因拼接技术或DNA重组技术。 　　操作环境：生物体外。 　　操作对象：基因。 　　操作水平：DNA分子水平。 　　基本过程：剪切→拼接→导入→表达。 　　结果：人类需要的基因产物。 　　二、基因工程的理论依据 　　1.基因之所以能嫁接的原因：不同生物的DNA具有相同的化学组成和空间结构。 　　2.DNA分子被“嫁接”上或“切割”掉某个基因，实际上并不影响各个基因遗传信息的表达，因为基因是遗传物质结构和功能的基本单位。 　　3.不同生物间基因移植能成功表达的原因：自然界各种生物共用一套遗传密码。 　　三、基因工程的基本工具 　　1.“分子手术刀”――限制性核酸内切酶（限制酶）。 　　（1）来源：主要是从微生物中分离纯化得到的。 　　（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。 　　思考1：限制酶的“限制性”主要体现在哪里？ 　　限制性核酸内切酶在生物体内能将外来的DNA切断，即能够限制异源DNA的侵入并使之失去活力，但对自己的DNA却无损害作用，这样可以保持细胞原有的遗传信息。由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的，故名限制性核酸内切酶。 　　（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式即黏性末端和平末端。 　　2.“分子缝合针”――DNA连接酶。 　　两种DNA连接酶（E?coliDNA连接酶和T4DNA连接酶）的比较： 　　（1）相同点：都缝合磷酸二酯键。 　　（2）区别：E?coliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶来源于T4噬菌体，能缝合两种末端，但连接平末端的效率较低。 　　3.“分子运输车”――载体。 　　使用载体有两个目的：一是用它作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞中去；二是利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。 　　（1）载体具备的条件。 　　①载体DNA必须有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到载体上去。这些供目的基因插入的限制酶的切点所处的位置，还必须是在质粒本身需要的基因片段之外，这样才不至于因目的基因的插入而导致其自身失活。 　　②载体DNA必须具备自我复制的能力，或可以整合到受体染色体DNA上，并随受体染色体DNA的复制而同步复制。 　　③载体DNA必须带有标记基因，以便重组后进行重组子的筛选。 　　④载体DNA必须是安全的，不能对受体细胞有害。 　　⑤载体DNA分子大小应适中，以便提取和在体外进行操作，太大则不便于操作。 　　思考2：天然载体可以直接使用吗？ 　　一般来说，天然运载体往往不能满足上述要求，因此根据不同的目的和需要，可以对运载体进行人工改造。现在使用的质粒载体几乎都是经过改造的。 　　（2）最常用的载体是质粒，它是一种具有自我复制能力的环状DNA分子。其他的还有噬菌体、动植物病毒等。 　　四、基因工程的基本操作程序 　　1.目的基因的获取。 　　（1）从基因文库中获取。 　　（2）用人工方法合成。 　　（3）PCR技术扩增。 　　2.基因表达载体的构建。 　　（1）目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代。 　　（2）组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因。 　　①启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。 　　②终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端。 　　③标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素基因。 　　思考3：假如某人控制胰岛素合成的基因的启动子部分发生突变，可能会发生什么结果？ 　　如果控制胰岛素合成的基因的启动子部分发生突变，会导致RNA聚合酶无法识别，进而影响到RNA聚合酶与启动子的结合，也就不能转录出直接控制胰岛素合成的mRNA，最终影响到