促孕散治疗持久黄体不孕奶牛血清微量元素与激素相关性分析.docVIP

促孕散治疗持久黄体不孕奶牛的血清微量元素与激素相关性分析 　　摘要：为探讨促孕散治疗持久黄体不孕奶牛的血液生殖激素与微量元素含量的关系，即分析其相关性与回归方程，用ELISA法测定了促孕散治疗持久黄体不孕奶牛前后血清中促卵泡激素（FSH）、促黄体激素（LH）、孕激素（P）和雌二醇（E2）的浓度，以原子吸收光谱法同时测定了血清Cu、Fe、Mn和Zn含量，统计分析了4种激素和4种微量元素间的相关关系与回归方程。结果表明，Cu、Mn与孕激素正相关，Fe、Zn与孕激素负相关；Cu与雌二醇负相关，Mn、Fe、Zn与雌二醇正相关；Cu、Fe与促卵泡激素为负相关，Mn、Zn与促卵泡激素正相关；Cu、Mn与促黄体激素负相关，Fe、Zn与促黄体激素为正相关。因此持久黄体不孕奶牛血清中微量元素含量对激素的分泌有影响。 　　关键词：促孕散；持久黄体不孕；奶牛；激素；微量元素；相关性 　　中图分类号： S823.9+13文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）02-0173-03 　　收稿日期：2013-06-20 　　基金项目：国家“973”计划前期研究专项（编号：2011CB512012）；国家自然科学基金（编号；国家科技支撑计划（编号：2012BAD43B01）。 　　作者简介：邓敏（1986―），女，重庆人，硕士，研究方向为中草药的开发与利用。E-mail：dengmin0447@163.com。 　　通信作者：谷新利，教授，博士生导师，从事中草药的开发与利用研究。E-mail：xlgu@。众所周知，生殖激素与动物繁育能力有极为密切的关系，奶牛生殖功能均是通过激素调控而实现的，掌握生殖激素的变化有助于了解奶牛各种生殖活动、泌乳、健康与疾病状态[1-2]。微量元素不仅是动物体内重要的组成部分，而且参与机体新陈代谢、繁殖机能和免疫机能[3-4]。微量元素是奶牛体内许多酶、激素、维生素的组成成分或活性因子，在奶牛的繁殖生理中起着重要作用，机体缺乏有关微量元素会引起性功能障碍[5]。奶牛不孕症是当今世界严重危害奶牛生产的4大疾病（蹄病、乳房炎、代谢病和不孕症）之一，给畜牧业造成重大经济损失，而在奶牛不孕症中持久黄体占了卵巢疾病相当大的比例[6]。用激素治疗由持久黄体疾病引起的久不发情母畜的效果不太理想，并且有药物残留和毒副作用，严重影响奶制品安全[7]。目前中药治疗奶牛不孕症越来越受到国内外学者们的青睐[8]。如罗瑞卿等用谷新利教授多年研制的中药复方促孕散，经大量临床试验证明治疗持久黄体奶牛不孕症，具有良好疗效[9]；国内其他学者采用中药治疗奶牛繁殖疾病，在奶牛不孕症的治疗效果中显著[10]。本试验分别测定了促孕散治疗持久黄体不孕奶牛前后奶牛血清中的4种微量元素和4种生殖激素的含量，统计分析了生殖激素和微量元素的相关性和回归方程，为研究与探讨微量元素治疗持久黄体不孕奶牛的生殖调控机理提供科学依据。 　　1材料与方法 　　1.1试验材料 　　仪器：AAS-AA7003型原子吸收光谱仪及Cu、Fe、Mn、Zn空心阴极灯（北京市东西分析仪器有限公司）；Power Wave XS2 BioTek酶标仪（Made in USA）。所有玻璃与塑料离心管等仪器均酸化处理。试剂：浓硝酸（分析纯），由北京化工厂生产；高氯酸（分析纯），北京化工厂生产；Cu、Fe、Mn、Zn标准溶液，含量均为 1 000 μg/mL，由中国计量科学研究院提供；空白溶液：为用去离子水与浓硝酸配制成的1%硝酸溶液；标准溶液的配制：用标准储备液与1%的硝酸配制系列标准溶液；试验用水均为去离子水；4种激素P、E2、FSH、LH的ELISA试剂盒，购于上海Blue Gene生物技术有限公司；中药促孕散由石河子大学动物科技学院中兽医课题组研制，药材购于石河子市中药公司。 　　1.2方法 　　1.2.1试验动物与分组选择新疆西部牧业股份有限公司、新疆建设兵团农八师143团保林牛场、新疆澳利亚牧业有限公司等牧场的临床病例，在排除传染病、寄生虫病及没有肉眼可见的生殖道疾病以及先天性因素的基础上，对产后60～75 d，年龄、胎次和体况相近并确认子宫没有炎症的不发情奶牛，经直检和B超检2次以上，共诊断出持久黄体症奶牛18头。 　　1.2.2投药及采血时间试验牛每天早晨9：00―10：00灌服促孕散400 g，每天1次，连续1个疗程（5 d），观察10 d仍不见发情者再灌服1个疗程。灌服促孕散前采血1次，灌服促孕散结束后第1、4、7、11、15、20 d各采血1次，共采血7次。采血时间为当天09：00―10：00。 　　1.2.3样品的采集和方法清晨空腹尾静脉采取血液 10 mL，室温静置自然析出血清，装于1.5 mL离心管中，置于 -20 ℃