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叶绿素荧光技术在快速检测油菜新鲜度中应用 　　摘要 为建立快速检测油菜新鲜度的叶绿素荧光动力学指标，以叶片叶绿素含量和可溶性蛋白含量为参照，分析叶绿素荧光参数变化趋势。结果显示，随着室温保存时间的延长，油菜叶片的叶绿素和可溶性蛋白显著下降，下降最快的时间分别是第3天和第2天。叶绿素荧光指标中Fm/Fo、Fv/Fm和RC/CSo与叶绿素及蛋白质的变化趋势相同且反应灵敏；ABS/CSo和DIo/CSo则随着室温保存时间的延长而增大；但ABS/CSo的增大可能是由于叶片透光度增加引起的。Sm、TRo/CSo、ETo/CSo等指标虽有一定的规律性变化，但反应不如上述荧光指标灵敏。以上结果表明，Fm/Fo、Fv/Fm、RC/CSo和DIo/CSo均可作为检测油菜新鲜度的灵敏指标。 　　关键词 油菜；叶绿素荧光技术；新鲜度 　　中图分类号 S311 文献标识码A文章编号1007-5739（2008）14-0010-01 　　 　　蔬菜营养丰富，是人们日常生活中不可缺少的的食品之一。但是大部分蔬菜的贮藏期很短，蔬菜采收后，由于贮藏不当或其他因素的影响，往往导致衰老变黄或腐烂，带来巨大经济损失。建立1种快速检测蔬菜新鲜程度的方法，对于蔬菜的科学贮藏和及时销售具有重要意义。 　　油菜是我国重要的蔬菜之一，采后极易失水，叶绿素及可溶性蛋白质含量下降，影响食用价值和商品价值。油菜采后衰变的原因主要是代谢紊乱、大量营养物质被消耗、细胞及细胞器解体等，导致蔬菜营养成分丧失，叶片功能下降[1]。 　　叶片的重要功能之一是进行光合作用，而叶绿素荧光动力学技术被称为测定叶片光合功能快速、灵敏、无损伤的探针[2]，能够全面而准确地反映植物叶片的生理状态。我们以油菜为试验材料研究发现，油菜叶片的叶绿素荧光参数随着叶片营养物质含量的下降而呈非常有规律的变化，可以灵敏、快速地检测油菜的新鲜度。 　　 　　1材料与方法 　　 　　1.1 材料的处理 　　从大田中选取新鲜健壮的油菜（Brassica napus L. cv. Topas），去除老叶和机械损伤的叶片，用清水洗净，然后用湿纱布覆盖，纱布上每天喷水1～2次，保持湿润（相对湿度80%以上），室温20~25℃下暗处放置0～4d，选择每棵油菜最嫩的成熟叶，每天上午测定叶绿素荧光参数、叶绿素含量和蛋白质含量，油菜采摘当天记为第0天。 　　1.2试验方法 　　1.2.1叶绿素含量的测定。参照张其德1985年的方法，用80%的丙酮提取叶绿素[3]，用紫外可见分光光度计（UV8500 II，中国上海）测定。 　　1.2.2可溶性蛋白质含量的测定。叶片可溶性蛋白含量测定根据Bradford（1976）方法，以牛血清蛋白为标准制作标准曲线[4]。 　　1.2.3叶绿素荧光参数的测定。将油菜植株暗适应30min后，用植物效率分析仪（Plant Efficiency Analyser，Handy PEA）测定玉米叶片荧光动力学指标。Handy PEA 光源为3个发光的二极管，激发光的发射峰在650nm（红色），光强为3 000 μmol/m2#8226;s，荧光信号的记录时程为2s，光聚集在直径为4mm的试验材料上，荧光用1个波段在695nm的滤光片过滤，然后用光电二极管检测，每天做10个重复。 　　各荧光参数生理意义：Fm/Fo表示光系统II（photosystem II，PSII）的电子传递情况；Fv/Fm表示PSII最大光化学效率；Sm=Area/Fv，表示标准化面积，它与质体醌库的大小成正比；ABS/CSo表示单位激发态横切面刚开始吸收的能量；TRo/Cso表示单位激发态横切面被反应中心吸收的能量；ETo/CSo表示单位激发态横切面用于电子传递能量；DIo/CSo表示单位激发态横切面以热能形式耗散的能量；RC/CSo表示单位激发态横切面含有的反应中心数目。以上指标的计算参见Strasser（2000）的方法[5]。 　　 　　2结果与分析 　　 　　2.1叶绿素与可溶性蛋白含量随保存时间的变化 　　Chla和Chlb是高等植物光合色素的主要组分，其含量与植物光合能力密切相关，也是叶类蔬菜的重要营养成分。因此，观察叶色是反映叶类蔬菜新鲜度和叶片活力的最直观、最常用的指标。由表1可以看出，油菜叶片的叶绿素含量随着室温保存时间的延长逐渐下降，在第3天开始下降最为显著。说明采后油菜在室温下的快速衰老始于第3天。 　　蛋白质既是重要的营养物质，也是生命最为重要的载体，蔬菜的采后衰变过程中最重要的生理生化变化之一就是蛋白质含量显著下降。表1结果显示，油菜叶片可溶性蛋白也随着采后室温保存时间的延长逐渐下降，其快速下降的时间比叶绿素早1d，始于第2天。 　　2.2叶绿素荧光动力学参数随保存