TAGLN2在小鼠卵巢的表达及与卵泡发育相关性的初步研究-妇产科学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 目 录 HYPERLINK \l _bookmark0 中文摘要 1 HYPERLINK \l _bookmark1 英文摘要 3 HYPERLINK \l _bookmark2 中英文缩略词表 6 HYPERLINK \l _bookmark3 前言 7 HYPERLINK \l _bookmark4 材料与方法 11 HYPERLINK \l _bookmark5 结 果 27 HYPERLINK \l _bookmark6 讨 论 35 HYPERLINK \l _bookmark7 【全文结论】 39 HYPERLINK \l _bookmark8 【参考文献】 40 HYPERLINK \l _bookmark9 综 述 45 HYPERLINK \l _bookmark10 致 谢 54 HYPERLINK \l _bookmark11 学位论文独创性声明 55 HYPERLINK \l _bookmark12 学位论文知识产权权属声明 55 HYPERLINK \l _bookmark13 学位论文使用授权声明 55 中文摘 中文摘要 TAGLN2 在小鼠卵巢的表达及与卵 泡发育相关性的初步研究 硕士研究生：官 蓉 花 专 业：妇产科学 导 师：杨洁 教授 中文摘要 目的 通过免疫组化染色检测 TAGLN2 在小鼠卵巢的表达，免疫荧光染色检测 TAGLN2 在小鼠卵母细胞中的表达水平，初步探讨 TAGLN2 与卵泡发育成熟的 关系。 方法 1 实验动物 3-4周龄和8周龄ICR清洁级雌性小鼠，体重在15-20g和25-35g。该 小鼠购自广东省医学实验动物中心，饲养于广州医科大学实验动物中心，所 有实验动物的操作及饲养均符合国家标准，遵循人道主义原则。动物许可证 号：SCXK(粤)2013-0002。 2 动物分组及处理 2.1 随机选择4周龄小鼠，分成4组，每组至少8只。使用PMSG腹腔注射促排卵， HCG诱导卵泡成熟，分别在不同的促排卵时间段收集小鼠卵巢，通过免疫组 化染色检测卵巢TAGLN2的表达。 2.2 随机选择8周龄雌性ICR小鼠，分为3组，每组至少10只。使用PMSG腹腔注 射促排卵，HCG诱导卵泡成熟，分别在不同的促排卵时间段收集小鼠卵母细 胞（GV期卵母细胞、GVBD期卵母细胞、MII期卵母细胞），通过免疫荧光 染色检测各组卵母细胞TAGLN2的表达。 2.3 随机选取8周龄小鼠分3组，每组至少8只，对照组、卵巢注射miR-133b minic 组及其阴性对照组，用Western-blot和实时定量PCR方法检测TAGLN2的下调 1 广州医 广州医科大学硕士学位论文 效率；使用PMSG腹腔注射促排卵，HCG诱导卵泡成熟，分别统计各组小鼠 获卵母细胞数。 2.4 数据及图像采集：卵巢免疫组化每个切片100倍、200倍、400倍镜下各取5个 视野；免疫组化切片和卵母细胞免疫荧光染色结果使用Image Pro Plus6.0图 像分析软件分析TAGLN2的平均光密度值和平均荧光强度。用Nikon体视显 微镜观察TAGLN2基因下调小鼠的卵母细胞，并统计各组小鼠卵母细胞数量。 结果 1. 免疫组化染色显示 TAGLN2 在小鼠卵巢窦前卵泡、窦状卵泡、排卵前卵泡、 黄体、闭锁卵泡和卵巢间质均有表达，且在卵巢中主要表达于颗粒细胞包膜 以及胞浆。 2. 免疫荧光染色结果显示 TAGLN2 在小鼠卵母细胞胞质中表达，GVBD 期卵母 细胞 TAGLN2 的表达水平显著低于 GV 期卵母细胞的表达水平（p＜0.05）， MⅡ期卵母细胞中 TAGLN2 的表达水平最低（p0.05）。 3. miR-133b 显著下调小鼠卵巢 TAGLN2 蛋白及 mRNA 的表达水平。miR-133b minic 下调 TAGLN2 后，小鼠的 GV 期及 MⅡ期卵母细胞数有增加趋势，但 各组比较无统计学意义（P＞0.05）。 结论 1. TAGLN2 在小鼠卵巢中表达，在卵巢中主要定位于颗粒细胞膜和细胞质， 卵母细胞胞质。 2. TAGLN2 在小鼠不同发育期卵泡和卵母细胞中的表达水平具有差异性。 3. miR-133b 可显著下调小鼠卵巢 TAGLN2 蛋白及 mRNA 的表达水平， TAGLN2 下调后，小鼠卵母细胞数有增加趋势，TAGLN2 的表达可能与 卵泡发育成熟相关。 关键词：TAGLN2；卵泡；卵母细胞；miR-133b；生殖 2 英文摘 英文摘要 The expression of TAGLN2 in mouse ovaries and preliminary study of the correlation between TAGLN