不同治法方药抑制小鼠H22肝癌移植瘤的作用机制-中西医结合基础专业论文.docxVIP

不! 不!可治法方药抑制小自 H )Jf指移植仰的 作用机制 材将与方法 材将与方法 .8. .8. -9- -9- 制进行比较研 究。 肿瘤的发生是 一个多因素相互作用的复杂过程，目前的研究已经深入到分子 生物学水 平。随着研究的一步步深入，人们逐渐认识到，人体众多细胞之间的协 调和密切合作是借相互间的信号传递而实现的，肿瘤的发生则导致细胞间的合作 关系破坏，并互为影响 。肿瘤细胞 在恶性改变前，往往存在某个或多个负责传递 生长信号的基因发生了突变，使该细胞脱离 正常生长调控系统 (细胞周期)，变成 不受增殖调控的细胞，导致细胞的无眼增殖。因此可以说肿瘤的发 生是丧失细胞 调控机能的结果， 而且肿瘤细胞分子水 平 的改变可能发生在影响细胞周期的不 同 通路上，发生在从生长因 子到受体、从细胞内的信 号分子到细胞核内的转 录 因子 等各个不同水平上。 本研究 主要探讨了活血化廉、清热桂湿、养阴柔肝三种治法对 H2 小鼠肝癌 瘤体的抑制作用机制，从增强机体免疫能力、抑制肿瘤细胞增殖以及诱导肿瘤细 胞凋亡这 三 个方面进 行了相关问题的研究，期望通过初 步的体内实验研究，能为 临床辩证治疗肝癌提供进 一步的理论依据 。 材料与方法 1 实验材料 1.1 实验动物 清洁级昆明小鼠，雌雄各半，体重 20 土 2g ，购于河南省实验动物中心 [许可 证号: SCXK (豫)2005-0001] ，并由其提供标准实验动物全价颗粒饲料 。 1.2 样本含量 估算 样本需要量的估算公 式[51: n=2o 2(ua+ up)2{P 式中， σ: 标准差，根据预实验 平均结果确定为 1.073; ?: 处理组与对照组均值之间的差异，根据预实验平均结果确定为 0.388; Ua: α 水平相应的标准 正态差，显著性 α=0.05 时，uO.o5=1.96; Up: 为 l-? 水平相应的标准正态 差 ，动物实验一般取 l-?=0.08 ，uo.o2=0.842 ; n: 为计算所得的样本数， 本实验估算样本数为 4 只，但考虑到肿瘤导致实验 动物耐受性差，将每组样本含量设定为 10 只，共50 只。 瘤株 H22 肿瘤瘤株 由河南省医学科学研究所提供。 H22 肿瘤瘤株 属小鼠的肝细胞瘤， 系 1952 年苏联医学科学院肿瘤研究院诱发的皮下传代的肝脏实体瘤， 1963 牢中 科院上海药物所引进后，将肝脏实体型瘤株变成腹水型瘤株，并在昆明小鼠腹腔 常规保存闷。 药品 1.4.1 活血化1Jl方药物: 当归 12 g ，桃仁12 g ，红花15 g ，山甲6 g ，挚虫15 g， 柴胡 12 g 1.4.2 清热桂温方药物:菌陈 30 g ，j帽子 15 g，大黄9 g ，厚朴 9 g ，陈皮9 旦， 泽 泻 12 g 1.4.3 养阴柔肝 方 药物:生地 30 g ，沙参12 g ，麦冬12 g ，拘祀12g，)11楝子 68{7l I.S 主要试剂 增殖细胞核抗原 ( Proliferation CeJl Nuclear Antigen ，PCNA ) 抗小鼠多克隆 抗体 北京博奥森公司，规格: 0.1 mL.批号: bs-0491R Bax (Bcl-2 associated X protein ，Bax ) 抗小鼠单克隆抗体 美国 Santa Cruz 公司，规格: 0.1 m L. 批号 :sc-7480 1.5.3 Bcl-2 (B ceJl lymphomaJleukemia-2 ，Bcl-2) 抗小鼠。单 克 隆抗体 美国 SantaCruz 公 司，规格:0.1 m L. 批号: sc-7382 小| 小|句;台法方 药抑制l小鼠Hfllj但移被捕的作用机制 材$斗 材$斗 勾方法 . . PAGE 12. CvclinDl 抗小 鼠单克隆抗体 美国 Santa Cruz 公 司，规格 :0.1 mL， 批号 : sc-8396 缺口末端标记 (TdT mediated dUTP nick ending labelling ， TUNEL) 试剂盒 德国 Roche 公 司 ，规格 : 10 人份，批号: 11 684 817 910 1.5.6 二步法免疫组 化检测试剂盒 美国 GBI 公司，规格: 6mL.批 号 :PV-9000 1.5.7 DAB 染色试剂盒 北 京中杉金桥公司，规格 : 3 mL. 批号 :ZLI-9032 1.6 主要仪器 1.6.1 KD-TS3 生物组织自动脱水机 (浙江省金华市科迎仪器设备有限公司) 1.6.2 KD-BM 生物组织冷冻包埋机 〈浙江省金华市科迪仪 器设备有限公司) 1.6.3 MICROM HM440E 切片机 1.6.4 KD-P