新辅助动脉化疗对宫颈癌细胞凋亡及Bcl2Bax影响.docVIP

新辅助动脉化疗对宫颈癌细胞凋亡及Bcl2Bax影响 　　作者单位：510180 广州市第一人民医院 　　通讯作者：陈佩锋 　　【摘要】 目的 检测宫颈癌行新辅助动脉化疗后细胞凋亡及Bcl-2、Bax的变化，探讨其意义。方法 选取宫颈癌Ⅰb2～Ⅱb期患者46例，动脉化疗前后宫颈活检，采用DNA片段末端标记法检测凋亡细胞，免疫组化法检测Bcl-2及Bax蛋白。结果 动脉化疗后，细胞凋亡指数（%）由0.67±0.21升高至3.57±1.29，P0.05；Bcl-2表达阳性率（%）化疗前为19.23±4.17，化疗后为8.15±5.03，化疗后较化疗前降低，P0.05；Bax表达阳性率（%）化疗前7.46±5.43，化疗后22.34±6.58，化疗后较化疗前明显升高，P0.05。结论 宫颈癌行新辅助动脉化疗后细胞凋亡增加，Bcl-2表达降低，Bax表达升高，Bcl-2/Bax比值降低，提示动脉化疗可通过提高Bax的表达，降低Bcl-2/Bax的比值，从而诱导肿瘤细胞凋亡。 　　【关键词】 宫颈癌； 动脉化疗； 凋亡； Bcl-2； Bax 　　 　　子宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，在国内居生殖系统恶性肿瘤首位。对于中晚期宫颈癌及年轻患者，术前或放疗前施行新辅助化疗，尤其是动脉化疗，越来越受到国内外专家的重视。已有研究显示，诱导肿瘤细胞凋亡是化疗药物抗肿瘤作用的主要机制之一。本研究通过检测宫颈癌动脉化疗前后肿瘤细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的变化，探讨动脉化疗治疗宫颈癌的作用机制，为个体化治疗方案的制定和新辅助动脉化疗的推广应用提供实验依据。 　　 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 选取2007年1月～2010年6月在广州市第一人民医院确诊为宫颈癌的患者46例，年龄26～63岁，平均39.1岁，经病理证实为宫颈鳞状细胞癌，根据FIGO分期标准，Ⅰb2期9例，Ⅱa期15例，Ⅱb期22例。先行动脉灌注栓塞化疗，根据化疗效果决定下一步行放疗或手术治疗，化疗前取活检，化疗后2周进一步治疗前再次活检。标本以10%甲醛固定后，常规石蜡包埋，4 μm厚连续切片制成玻片。 　　1.2 方法 　　1.2.1 动脉化疗 常规右侧股动脉穿刺插管后，在DSA显影下以Seldingers技术将导管置入双侧骼内动脉，造影后超选择插管进入子宫动脉，缓慢推注卡铂2/3量，持续20 min，后以新鲜明胶海绵颗粒混合1/3量的卡铂栓塞子宫动脉，造影证实栓塞完全后，退导管至髂内动脉前干，灌注博莱霉素30 mg（双侧）。化疗方案为卡铂［按肌酐清除率×5 mg/（ml?min）计算］＋博莱霉素30 mg（总量）。 　　1.2.2 凋亡检测 通过DNA片段末端标记（Fragment End Labeling，FragELTM）检测凋亡细胞。试剂盒购于德国Calbiochem公司，具体步骤参照试剂盒说明进行。阳性对照为经蛋白酶K及Dnase I处理后的标本，阴性对照以dH2O代替TdT制成。 　　1.2.3 Bcl-2、Bax的检测 采用相应单克隆抗体以免疫组化S-P法检测，试剂盒购于福州迈新生物技术有限公司，具体步骤参照试剂盒说明进行。以已知阳性切片为阳性对照，以PBS代替一抗为阴性对照。 　　1.2.4 结果判定 凋亡细胞以细胞核出现棕黄色颗粒，同时伴有细胞体积缩小、核固缩或呈碎裂状为阳性，Bcl-2以细胞膜及细胞浆显示棕黄色颗粒为阳性，Bax以细胞浆中出现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性。随机观察5个高倍视野，计算每一病例阳性细胞的比例，以百分率表示，称为标记指数，凋亡指数为AI。Bcl-2和Bax阳性率10%定义为阳性，10%为阴性。 　　1.3 统计学分析 应用SPSS 13.0软件进行统计学软件对数据进行处理，结果采用t检验及Pearson相关性分析。以P0.05为差异有统计学意义。 　　 　　2 结果 　　2.1 动脉化疗前后肿瘤细胞凋亡的变化 检测结果显示，凋亡细胞多散在分布，部分呈局灶性分布。化疗前宫颈癌细胞凋亡指数（%）为0.67±0.21，化疗后凋亡指数（%）为3.57±1.29，化疗后肿瘤细胞凋亡较化疗前增加，差异有统计学意义（P0.05）。 　　2.2 动脉化疗前后Bcl-2、Bax表达的变化 免疫组化结果显示，Bcl-2及Bax的阳性颗粒均为胞浆型，多呈局灶性分布，少部分呈弥漫性分布。Bcl-2的表达化疗后较化疗前下降（P0.05）；而Bax表达在化疗后较化疗前呈明显上升趋势，提示差异有统计学意义（P0.05）；且化疗后Bcl-2/Bax的比值较化疗前降低。见表1。 　　表1 化疗前后Bcl-2与Bax的表达 　　 　　注：Bcl-2化疗前后相比，P0.05；Bax化疗前后比较，P0.05 　　2