胡柚皮黄酮对非酒精性脂肪性肝炎小鼠肝组织SIRT1PGC―1α通路影响.docVIP

胡柚皮黄酮对非酒精性脂肪性肝炎小鼠肝组织SIRT1PGC―1α通路影响 　　[摘要] 目的：观察胡柚皮黄酮（PTFC）对非酒精性脂肪性肝炎（NASH）小鼠肝组织脂肪变、炎症程度、氧化应激水平及SIRT1，PGC-1α表达的影响，探讨PTFC防治NASH的作用机制。方法：以高脂饮食喂养16周诱导小鼠NASH模型，于造模第7周起以100，50，25 mg?kg-1?d-1的PTFC干预10周，HE染色观察肝组织病理学变化，生化法检测肝组织TG，CHOL含量和血清ALT，AST水平；Real-time PCR法检测肝组织SIRT1，PGC-1α，MnSOD mRNA表达；免疫组织化学法检测肝组织SIRT1，PGC-1α蛋白及8-OHdG表达；黄嘌呤氧化酶法检测肝组织SOD水平；硫代巴比妥酸法检测肝组织MDA含量。结果：高脂饮食诱导的NASH模型组小鼠肝组织TG，CHOL水平、NAFLD活动度积分、血清ALT较正常组显著增高（P0.01），肝组织SIRT1，PGC-1α，MnSOD mRNA和蛋白表达较正常组显著降低（P0.01），肝组织8-OHdG表达和MDA含量较正常组明显增高（P0.01）；不同剂量PTFC干预后小鼠肝组织的NAFLD活动度积分、TG水平、血清AST较模型组显著降低（P0.01，P0.05），肝组织SIRT1，PGC-1α，MnSOD mRNA和蛋白表达较模型组明显增高（P0.01，P0.05），8-OHdG表达和MDA含量较模型组明显减少（P0.01）。结论：高脂饮食诱导小鼠NASH氧化应激/脂质过氧化增强可能与SIRT1/PGC-1α信号转导通路的改变有关；PTFC能通过调节SIRT1/PGC-1α信号通路，增强肝脏抗氧化能力，减少脂肪酸代谢过程中活性氧的损伤，防治NASH的发生发展。 　　[关键词] 非酒精性脂肪性肝炎；氧化应激；沉默信息调节因子1；过氧化物酶增殖物激活受体γ辅助激活因子-1α；胡柚皮黄酮 　　[收稿日期] 2013-06-28 　　[基金项目] 浙江省自然科学基金项目（LY13H290011）；浙江省中医药科学研究基金项目（2013ZA047） 　　[通信作者] *陈芝芸，研究员，博士生导师，Tel：（0571E-mail：zhiych123@163.com 　　非酒精性脂肪性肝炎（nonalcoholic steatohepatitis，NASH）是一种常见的肥胖相关性代谢性疾病，其确切的机制尚未明确。氧化应激是NASH肝损伤和疾病进展的关键环节[1]，因此，抗氧化治疗成为NASH防治的关键。沉默信息调节因子1（silent information regulator 1，SIRTI） 是新近发现的NAD+依赖性去乙酰化酶，在调节糖脂代谢、抗氧化应激等多方面发挥重要作用[2-3]。SIRT1与脂肪肝等肥胖相关性代谢性疾病的发生密切相关[4]，适度的过表达SIRT1能预防高脂诱导的脂肪肝[5]。 　　胡柚皮为芸香科柑橘属常山胡柚Citrus changshan-huyou Y.B chang的干燥成熟果皮，主要活性成分是黄酮类化合物，具有抗氧化、抗衰老、降血脂等作用[6]。胡柚皮黄酮（pure total flavonoids from Citrus，PTFC）是从胡柚皮中分离、纯化的黄酮类化合物，主要由柚皮苷（naringin）、新橙皮苷（neohesperidin）、柚皮芸香苷（narirutin）等3种黄酮类化合物组成的主要成分明确、含量固定的黄酮组分。本研究观察PTFC对高脂饮食诱导的NASH小鼠肝组织的脂肪变、炎症程度及氧化应激水平的影响，并观察PTFC对NASH小鼠肝组织氧化应激的影响是否与调节SIRT1及其下游PGC-1α的表达有关，为其应用于NASH提供实验依据， 为NASH中药防治研究提供思路。 　　1 材料 　　1.1 动物 C57BL/6健康雄性小鼠，体重18～22 g，SPF级，由上海市西普尔-必凯实验动物有限公司提供，合格证号SCXK（沪）2007-0005。 　　1.2 药品与试剂 胆固醇（上海伯奥生物有限公司，批号100901）；3号胆盐（杭州微生物试剂有限公司，批00）；PTFC为本院中药制剂室采用大孔树脂从胡柚皮中分离、纯化，主要由柚皮苷、新橙皮苷、柚皮芸香苷等3种黄酮类化合物组成，总黄酮质量分数76.22%；天门冬酸转氨酶（AST）测定试剂盒、丙氨酸转移酶（ALT）测定试剂盒由上海森能-德赛诊断技术有限公司提供；甘油三酯（TG）测定试剂盒（批号125421）、胆固醇（CHOL）测定试剂盒（批号121371）均由中生北控生物科技股份有限公司提供；丙二醛（MDA）测定试剂盒（批