雌激素α受体基因多态性对原发性胆汁性肝硬化TH1TH2类细胞因子表达影响.docVIP

雌激素α受体基因多态性对原发性胆汁性肝硬化TH1TH2类细胞因子表达影响 　　摘要：目的：探究雌激素α受体基因多态性对原发性胆汁性肝硬化Th1 、Th2类细胞因子表达的影响，为临床诊断治疗提供依据。方法：选择本院34名原发性胆汁性肝硬化患者为研究对象，检测每位患者雌激素α受体基因以及th1 th2类细胞因子表达情况，并与正常人结果进行对比分析，为临床诊断治疗提供依据。结果：肝严重损害的患者的IL- 4、 IL- 10含量与肝轻度损害患者的无明显差异，无统计学意义（P0.05）其含量与r谷氨酰转移酶以及碱性磷酸酶（GGT和ALP）呈正相关；而肝严重损害的患者IL- 2 和TNF- a的含量明显高于肝轻度损害患者，有统计学意义（P0.05），其含量与GGT和ALP呈负相关。雌激素α受体基因中的Pp基因是肝硬化发病的易感基因，Xbal和PvuII基因的多态性会增加雌激素受体的转录翻译，增加雌激素受体的含量。此外，ERα基因多态性可作为遗传易感背景影响PBC患者体内T细胞亚群的偏移及其相关细胞因子的表达。结论：雌激素α受体基因的多样性表达Th1 、Th2类细胞因子的含量不同，Th1 类细胞因子介导了对肝脏细胞的破坏作用， 而Th2 型细胞因子则具有一定的保护性作用。雌激素α受体基因中的Pp基因是肝硬化发病的易感基因，同时，雌激素受体基因的多态性会增加肝硬化发生的机率，也会影响PBC患者体内T细胞亚群的偏移及其相关细胞因子的表达。 　　关键词：雌激素α受体基因多态性；原发性胆汁性肝硬化；th1 th2类细胞因子 　　中图分类号：R575.2 文献标识码：A 文章编号：1005-0515（2013）9-002-02 　　原发性胆汁性肝硬化（ PBC） 是一种自身免疫疾病。该病的临床表现主要是长期梗阻性黄疸、因胆汁刺激引起的皮肤瘙痒以及肝大等症状，可伴有高脂血症以及黄色素瘤[1]。肝内小叶间胆管上皮可发生空泡性变性坏死，有胆汁淤积和淋巴细胞浸润，纤维组织进而增生分割小叶，最终导致肝硬化、肝功能衰竭。本次研究通过34名原发性胆汁性肝硬化患者的临床资料，来探究雌激素α受体基因多态性对原发性胆汁性肝硬化Th1 、Th2类细胞因子表达的影响，为临床诊断治疗提供依据。详细报道如下： 　　1资料与方法 　　1.1 一???资料 　　选择本院2009年至2012年在本院治疗原发性胆汁性肝硬化的34名患者为研究对象，男5名，女29名，年龄35-65岁，平均年龄（54±3.2）岁，每位患者均符合原发性胆汁性肝硬化的诊断标准[2]，均未使用过糖皮质激素类、免疫方面类以及熊去氧胆酸治疗，同时每位患者均无肝内占位病变以及其他恶性肿瘤消耗疾病，又根据肝功能异常的程度分类：肝功能严重损害组9名：r谷氨酰转移酶以及碱性磷酸酶高于正常值的5倍；肝功能轻度损坏组11名：r谷氨酰转移酶以及碱性磷酸酶低于正常值的5倍。缓解组14名：经过正规治疗后，肝功能指标均大致达到正常水平，其中，男1名，女13名，年龄为36-65岁，平均年龄为（53±4.7）岁。同时，选择32名健康人为对照组，男4人，女28名，年龄为35-64岁，平均年龄（53±4.2）岁。 　　1.2 Th1、Th2类细胞因子mRNA表达的检测 　　取每位研究人员的外周血，采取密度梯度离心法，分离单个核细胞，并置于完全培养液中培养，在培养6小时和24小时后收集细胞，置于37°培养箱里培养，采用异硫氰酸肌法提取细胞RNA，并应用分光计度计比色计量，将其培养液加入逆转录酶、dNTPs、RNasin以及相应的反应缓冲液，进行逆转录，1小时后加热再迅速降温，分离cDNA，放入冰箱内备用。引物扩增应用细胞因子特异引物序列，在10ul的cDNA中加入dNTPs、引物、Taq酶、反应缓冲液，配成聚合酶链式反应（PCR）产物，进行琼脂糖凝胶电泳，采取扫描成像分析，分别测出Th1、Th2类细胞因子的表达情况，认真记录血清白细胞介素- 4（ IL-4） 、白细胞介素- 10 （ IL- 10） 、肿瘤坏死因子α （ TNF- a）以及白细胞介素- 2 （ IL- 2）的含量[3]。 　　提取到的RNA进行纯度测定并定量，并根据表达Th1 、Th2类细胞因子的引物序列自行设计引物，详细见表1 　　上述反应采取取5μlPCR产物与2μl Lodding Buffer混合，进行1.5%琼脂糖凝胶电泳，100V 1.5小时，电泳结束后，凝胶成像仪成像分析，以来了解肝硬化病人RNA中Th1 、Th2类细胞因子的引物序列，为细胞因子的水平与肝功能损伤的关系提供依据。 　　1.3雌激素α受体基因多态性情况 　　采用焦磷酸测序技术检测各位点，计算基因型和等位基因型频率，测定的 5 个SNP 位点（ESR1：rs2234693、r