香菇胞外酶活性变化及其与农艺性状相关性分析.docVIP

香菇胞外酶活性变化及其与农艺性状相关性分析 　　摘要：室内测定结果表明，纤维素酶、淀粉酶、邻苯二酚氧化酶在菌丝生长期、转色期、出菇期活性持续增高，愈创木酚氧化酶与漆酶活性在转色期达到峰值，在出菇期活性下降。纤维索酶与淀粉酶呈显著正相关。菌丝期漆酶活性与产量呈极显著正相关，与转色期呈显著负相关；转色期纤维素酶、淀粉酶、漆酶相互呈显著正相关，漆酶与产量呈显著正相关，与出菇期呈显著负相关。出菇期中的各种酶活性与香菇农艺性状间无显著相关性。 　　关键词：香菇；胞外酶；农艺性状；相关性 　　中图分类号：S646.1 20.1　文献标识号：A　文章编号：1001―4942(2010)12―0011―04 　　 　　香菇[Lentinus edodes(Berk.)sing.]是优良的食药兼用菌，有增强人体免疫力、降血脂、抗病毒等作用。作为白腐菌的一种，香菇主要栽培基质是木屑，能够通过胞外酶作用降解木质素、纤维素，并将其转化为蛋白质、多糖等。香菇的栽培不仅大量降解了木质素、纤维素，为人类提供了食物和多种药用成分，而且能够带来巨大的经济效益。据中国食用菌协会统计，2002年中国香菇产量约为200×104t，占世界总产量的80％以上，直接产值达66.5亿元。香菇对木质素的降解和转化是通过胞外酶的作用来完成的，其中关键酶为锰过氧化酶、木质素过氧化酶和漆酶这三种酶协同作用于连结木质素结构单元之间的醚键和酯键。首先使木质素分解成为单个的结构单元，在此基础上，进一步催化苯丙烯醇之间的C-CB键断成两分子苯丙烯醇，最后苯丙烯醇断链降解为小分子化合物，完成木质素的降解。 　　胞外酶活性与香菇菌丝生长和子实体发生有密切关系。酶活性的大小直接影响生物降解的能力。不同香菇菌株胞外酶系均有不同程度的活性，香菇胞外酶活性的动态变化与其生长发育周期有着紧密联系，菌株木质素氧化酶系在菌丝旺盛生长时期活性达最高峰，但在子实体分化时期很快下降。在同一发育时期，愈创木酚酶、漆酶活性多高于邻苯二酚酶的活性。研究表明，在香菇的整个生长过程中产子实体菌株的几种酶活性均高于不产子实体的菌株，尤其在形成子实体的第二和第三阶段。培养料成分的不同只影响酶活性的相对大小，而不影响酶活性变化的规律性；大部分酶随着每一潮子实体的成熟出现一个活性峰值：营养生长阶段酶活性总体上表现上升趋势，生殖生长阶段则呈下降趋势，部分酶活性在后期丧失。香菇菌株的质量是由诸多农艺性状构成的，对香菇农艺性状之间的相关性、数量遗传研究已有报道。但有关香菇菌丝体生长阶段胞外酶活性与农艺性状间的相关性研究尚未见报道。本试验旨在研究香菇几种胞外酶活性的动态变化及与产量等农艺性状的相关性，为香菇的生物转化、良种选育等研究提供理论依据。 　　 　　1　材料与方法 　　 　　1.1　供试菌株 　　香菇(Lentinus edodes)L26，由山东省农业科学院土壤肥料研究所提供。 　　 　　1.2　栽培试验设计 　　培养基配方：杂木屑78％，麸皮20％，糖1％，石膏1％。栽培袋规格：17cm×33cm，试验设3个小区，即重复3次，每小区100袋，随机排列，常规管理。 　　 　　1.3　样品的采集及预处理 　　每小区选取菌丝体均匀生长的香菇栽培袋5个，3小区共选取15袋。将栽培袋置于超净工作台上解开袋口，每袋各取菌棒中心部位基质2g分别置于研钵中，每钵加入蒸馏水16ml将样品研碎，然后将其倾入小烧杯中置于4℃的冰箱内浸提16h。 　　 　　1.4　酶液的提取 　　将15个小烧杯内的试样过滤，所得到的滤液即为测定所需要的酶液。每一小烧杯内的滤液分到两支试管中，其中一管置于沸水浴灭活10min，作为比色对照。 　　 　　1.5　菌丝体酶活力的测定 　　1.5.1　纤维素酶活力的测定　在试管中加入0.5％的羧甲基纤维素钠(CMC-Na2)溶液1.5ml，加稀释10倍的酶液0.5ml，50℃水浴保温30min，取出后立即加入DNS试剂1.5ml，煮沸5min，取出冷却后加蒸馏水至25ml，混匀，然后于520nm处测OD值(每只试管测3次，下同)。酶活力单位(u)以样品中所含酶反应30min后光密度改变值(AOD)的O.01表示。 　　1.5.2 淀粉酶活力的检测 在试管中加入0.5％的可溶性淀粉溶液1.5ml，加稀释10倍的酶液0.5 ml，40℃水浴保温30min，取出后立即加入DNS试剂1.5ml。煮沸5min，取出冷却后加蒸馏水至25 ml，混匀，然后于520nm处测OD值。酶活力单位(u)以样品中所含酶反应30min后光密度改变值(AOD)的0.01表示。 　　1.5.3　木质素降解酶系活力的检测　按表1进行试验，所有反应均在28℃的恒温水浴中进行。准确反应30min后立即测OD值