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黑青稞花色苷提取及抗氧化活性分析 　　摘要：为探讨黑青稞色素资源的开发与利用，以完整黑青稞种子为材料，在单因素试验基础上结合响应面分析法，以提取温度、液料比、乙醇浓度、pH值为因素，花色苷提取量为响应值优化黑青稞花色苷提取工艺，进而测定其还原能力，以及清除1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基、羟自由基、超氧阴离子自由基的能力。结果表明，黑青稞花色苷最佳提取工艺参数为提取温度60 ℃，液料比10.04 mL ∶ g，乙醇浓度55.76%，pH值1，在该条件下提取1 h花色苷的实际提取量为 9.68 mg/100 g，而在此基础上使用超声波提取40 min，提取量达到14.04 mg/100 g，提高了提取效率。同时所提黑青稞花色苷的抗氧化活性较强，且抗氧化能力与花色苷浓度间存在剂量效应关系；与维生素C（vitamin C，简称VC）相比，黑青稞花色苷清除DPPH自由基和羟自由基能力较强，但还原能力和清除超氧阴离子能力没有VC强。黑青稞花色苷对自由基的清除能力大小依次为DPPH自由基羟自由基超氧阴离子自由基，半抑制浓度（50% inhibitory concentration，简称IC50）依次为0.186、0.268、0.293 mg/mL，说明黑青稞花色苷是一种较好的天然抗氧化剂。 　　关键词：黑青稞；花色苷；响应面法；提取工艺；抗氧化活性 　　中图分类号： S512.301 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2017）18-0173-06 　　收稿日期：2016-04-20 　　基金项目：云南农业大学创新基金。 　　作者简介：杜道坤（1989―），男，河南信阳人，硕士研究生，主要从事作物遗传和品种改良研究。E-mail：490041070@。 　　通信作者：康志钰，博士，副教授，主要从事作物遗传育种及种子科学与工程方面的研究。E-mail：zhiyukang@163.com。 青稞（Hordeum vulgare Linn. var. nudum Hook.f.）在植物分类学上为禾本科大麦属普通大麦种多棱裸粒大麦变种[1]。我国拥有丰富的青稞资源，品种繁多、种类各异，其中黑青稞是一种独特的种质资源，具有很大的开发价值。黑青稞种皮中含有丰富的花色苷而区别于普通白青稞，单月琴就从囊谦黑青稞的酸性乙醇提取液中鉴定出可能的7种花色苷[2]。花色苷是一种的水溶性的天然色素，它主要存在于植物的花、果实、种子中，从而使它们呈现出黑、紫、蓝等多种颜色。现代研究证明，人工合成的色素对人类的健康存在潜在的致畸性、致癌性[3]，而天然色素花色苷不仅无毒无害，还具有清除自由基、防癌抗肿瘤、清脂减肥等与人类健康息息相关的功能[4-6]，所以黑青稞具有生产天然色素的开发和利用前景，而提取其中的花色苷是利用黑青稞的第1步，研究其提取工艺具有重要意义。 　　不同的提取条件对黑青稞花色苷的提取效果存在不同的影响。响应面分析法（response surface methodology，简称RSM）就是使用多元二次回归方程来拟合多个提取条件（因素）与试验指标（响应值）之间的函数关系，并通过分析回归方程来优化工艺参数，它保留了正交?验工作量少的优点，还克服了不能在整个区域上得出最佳因素组合和最优值的缺点[7-8]。陈建国等使用这种方法以黑青稞种子粉为材料优化了其花色苷的提取工艺[9]。但是青稞种子中淀粉成分独特，普遍含有74%～78%的支链淀粉，有的甚至更高[10]，使用种子粉提取在加热的过程中使提取液变得黏稠、糊化而影响测定结果，且黑青稞花色苷多数集中在种皮，所以本研究以去杂的、完整的黑青稞种子为材料，使用响应面法优化其提取工艺，并初步探索超声波辅助提取黑青稞花色苷，同时测定所得花色苷提取液的抗氧化活性，旨为黑青稞天然色素的进一步研究和开发利用奠定基础。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料与试剂 　　以云南省当地种皮颜色为黑色的青稞为材料。 　　主要试剂有甲醇、乙醇、盐酸、三氯乙酸、柠檬酸、冰乙酸、甲酸、乙酸乙酯、30%双氧水、硫酸亚铁、水杨酸、1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，简称DPPH）、铁氰化钾、氯化铁、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、Tris-base、邻苯三酚，均为分析纯。 　　1.2 仪器设备 　　主要仪器有Agilent Cary60紫外-可见光分光光度计（美国安捷伦公司）、Alpha 1-2型冷冻干燥机（德国Martin Christ公司）、RE-52B旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）、予华SHZ-D型循环水式真空泵（巩义市予华仪器有限责任公司）、KQ32001超声波震荡器（东莞市柯桥超声波设备有限公司）、YXT-2型高速电动离心机、恒温