差异性培养法诱导骨髓间充质干细胞成类髓核细胞的比较-外科学(骨外)专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 目 录 中文摘要··························································3 Abstract 5 英文缩略词表·······················································7 前 言······················································ 8 引言·······························································10 材料与方法························································10 结果·······························································21 讨论·······························································37 参考文献···························································40 致谢·······························································43 综述·······························································44 2 差异性培养法诱导骨髓间充质干细胞成类髓核细胞的比较 【目的】 中文摘要 1、证实 TGF-β1 和 IGF-1 单独及联合都能够诱导 BMSCs 向类髓核细胞分 化。 2、在骨髓间充质干细胞和髓核细胞体外非接触共培养条件下，探讨不同比 例 TGF-β1(转化生长因子β1)和 IGF-1(胰岛素样生长因子 1)诱导骨髓间充质干 细胞向类髓核细胞转化的作用。 【方法】 应用贴壁培养法体外分离、鉴定、培养、扩增兔 BMSCs 和髓核细胞;将原代 髓核细胞和第二代生长良好的 BMSCs 消化后制成细胞悬液,然后在 transwell 培 养板中共培养,上层放 BMSCs,下层放 NPCs,分为不加入（对照组）,加入 IGF-1（实 验组 1 ）、 TGF- β 1 （ 实 验 组 2 ）、 IGF-1 与 TGF- β 1 混 合 （ 比 例 分 别 为 10:1,5:1,1:1,1:5,,1:10,相对应实验组 4、5、6、7、8）诱导;共培养 5、10、 15、20、25d 后,分别观察细胞形态变化,并利用 RT-PCR（reverse transcription PCR） 和 Western blot 检测其表达的蛋白聚糖和Ⅱ型胶原含量,以寻找最佳培养方式。 【结果】 RT-PCR 和 Western blot 检测结果,发现在 8 组实验中，第 5、10、15 天,蛋 白聚糖和Ⅱ型胶原表达的相对含量都逐渐增加,组间比较均具有统计学意义,而在 第 15、20、25 天,二者相对含量变化不大,组间比较无统计学意义。在相同的培养 条件下，当 IGF-1/TGF-β1 的比值 1/5 时,蛋白聚糖和Ⅱ型胶原表达的相对含量达 到最大,组间比较均具有统计学意义,而 IGF-1/TGF-β1 比值继续增大时,二者相对 含量变化不大,组间比较无统计学意义。 【结论】 1、BMSCs 和 NPCs 共培养可以诱导 BMSCs 向 NPs 分化,并且共培养 15 天左右, 蛋白聚糖和Ⅱ型胶原表达含量已达到最佳状态。 2、TGF-β1 和 IGF-1 单独及联合都能够诱导 BMSCs 向 NPs 分化。 3、在定量的 BMSCs 和 NPCs 体外共培养条件下,IGF-1 与 TGF-β1 比例为 3 1:5 时，经诱导的骨髓间充质细胞合成Ⅱ型胶原和蛋白聚糖蛋白已达到最佳值。 【关键词】 生长因子;椎间盘退变;骨髓间充质干细胞;髓核细胞; 4 Comparison by differential ways on BMSCs induced into Nucleus Pulposus-like cells in vitro studies [Objective] ABSTRACT Discussing the relationship of TGF-β1 and IGF-1 that can induce BMSCs into nucleus pulposus- like cells and synthesis collagen type II and proteoglycan in a dose-de