发酵法生产L异亮氨酸的优化与控制策略研究-发酵工程专业论文.docxVIP

州州maaT阳刷 州州maaT 阳刷刷句，h 州州5 州川州明41· 阳川川a叫AV 恻川翩o。 mm川 dEE 州州Y 摘要 L-异亮氨酸作为人体八种必需氨基酸之一和三种文链氨基酸之一，由于它特殊的结 构和功能在人体生命代谢中具有重要作用，它是合成激素、酶炎等的原料，具有促进蛋 白质合成并可以抑制其分解的作用。 L异亮氨酸已被广泛应用于食品工业、生物医药、 化妆品、组织工程、光化学、电化学等领域。目前， L-异亮氨酸也已大量用于饲料添加 剂以及添加到饮料中生产功能性饮料。 本论文以一株可以在细胞外积累 b异亮氨酸的乳糖发酵短杆菌 (Brevibacterium lactofermentation) 作为生产菌株，以进一步提高 b异亮氨酸的产量、底物转化率和生产 强度为目标，对 b异亮氨酸发酵过程进行了…系列优化。主要研究内容和结果如下 t (1) 采用 DO-stat 流加控制培养策略，研究了洛氧浓度 20%、30%、35%和 40%对 且 lactofermentation 分批发酵生产 L异亮氨酸的影响，结果表明溶氧浓度控制在 20%时， b异亮氨酸的产量较高，为 24.3 gIL，与对照相比提高了 15.7%，但12.2%的糖酸转化率 较分批发酵低。为提高细胞对葡萄糖的利用率，在 DO-stat 流加发酵的基础上，提出了 快速补料分批发酵的策略，结果表明在 36h 和 52h 分别添加 150 mL的新鲜培养基，发 酵液中残留葡喝糖盘下降， L-异亮氨酸产量为 26.0 g/L，比对照提高了 7.0%，且糖酸转 化率也有提高，为 13.0%。在DO-stat 流加发酵的基础上，考察了不同初始葡萄糖浓度 对 L异亮氨酸合成的影响，在葡萄糖浓度 80 g/L的条件下，细胞生长较快，糖耗也快， 最先进入 DO-stat 流加控制培养，葡萄糖浓度 140 g/L的条件下最后进入流加阶段，最 终 L异亮氨酸产量较高，为 26.2 gIL，但糖酸转化率较低，综合考虑，初始葡萄糖浓度 还是选择 100 g!L o 。)研究了发酵中后期恒定不问葡畸糖浓度条件下L-异亮氨酸的合成情况，发现不 同葡萄糖浓度对 L异亮氨酸的合成影响有明显差异，其中，葡萄糖浓度假定在 20 g!L 时， L-异亮氨酸的产最较高，为 26.8 g!Lo 通过分析不同条件下 L异亮氨酸的比合成速 率曲线，提出了分阶段控制葡萄糖浓度的策略，即采用 24h-48 h 葡葡糖浓度控制在 20 g!L， 48 h-68 h 葡萄糖浓度控制在 5.0 g/L的两阶段葡萄糖浓度控制策略，稳定期后细胞 浓度比分批发酵有提高，大约 42.5 左右， L-异亮氨酸的产量较高，为 31.6 g!L，比葡萄 糖浓度恒定在 20 g!L的水平提高了 17.91%，糖酸转化率以及生产强度均有所提高，分 别为 13.8%和 0.465 g/(Vh)。 。(勿在摇瓶水平上考察了生物索、 VBl 、蛋氨酸以及拧橡酸纳4 种物质对 L异亮氨 酸产量的影响，影响顺序为蛋氨酸 VBI生物索〈拧橡酸纳，其中，竹橡酸饷浓度为 4. 。 例，时，对 L异亮氨酸的合成促进作用最明显，为 11.4 以..，比对照提高了 19.75%。并 在 3 L 发酵罐中进一步研究了添加 4.0 g!L拧橡酸纳对 L异亮氨酸发酵的影响，结果表 明拧橡酸铀的添加对细胞生长影响不大，但溶解氧及葡萄糖的消耗速率均被减弱， L-异 亮氨酸的合成速率在很大程度上得到提商，产量为 27.1 gIL，比对照提高了 16.3 1%。最 后应用代谢工程的方法，建立了且 lactofermentation 合成 b异亮氨酸的代谢网络图，通 过代谢流囊分析手段，初步分析了添加拧橡酸铀对 L异亮氨酸代谢流最的影响。结果显 摘要 示:添加 4.0 g/L竹橡酸纳后， EMP 途径的流量减少了，而 HMP 途径的代谢流增加了， 为 L异亮氨酸的合成提供了充足的还原力 NADPHo 关键词: L-异亮氨酸， DOstat，葡萄糖浓度，拧橡酸纳，代谢流量分析，乳糖发酵短杆 菌 Abstract L-isoleucine，which is one of eight essential amino acids of human body and also one of three branch-chain amino acids，plays an important role in human lifeωit special structure and function. It 扭曲.e material ωsynthesize some human hormones and enzymes，and it can enhance protein