反复熔铸对非镍基烤瓷合金细胞毒性的影响及其机制的研究-口腔临床医学专业论文.docx

目 录 英文缩略词表…………………………………………………………………………3 中文摘要………………………………………………………………………………4 英文摘要………………………………………………………………………………6 前言……………………………………………………………………………………8 正文 第一部分：反复熔铸对非镍基烤瓷合金离子析出的影响…………………………11 第二部分：反复熔铸对非镍基烤瓷合金体外细胞毒性的影响……………………28 第三部分：反复熔铸非镍基烤瓷合金对 L-929 细胞细胞周期的影响……………46 第四部分：反复熔铸非镍基烤瓷合金对 L-929 细胞细胞凋亡的影响……………61 全文总结……………………………………………………………………………75 参考文献……………………………………………………………………………77 致谢…………………………………………………………………………………84 综述：细胞毒性试验在口腔合金材料生物相容性评价中的应用………………85 - 2 - 英文缩略词表 缩写 英文全称 中文全称 DMEM Dulbecco’s Modified Eagle Medium 细胞培养液 DMSO Dimethye Sulfoxide 二甲基亚砜 EDTA Ethylene Diamine Tetraacetic Acid 乙二胺四乙酸 FBS Fetal Bovine Serum 胎牛血清 FCM Flow Cytometry 流式细胞仪 FITC Fluorescein Isothiocyanate 异硫氰酸荧光素 ICP-AES Indictive Coupled Plasma-Atomic Emission Spectroscopy 电感耦合等离子体发射 光谱仪 MTT Methyl-thiazolyl-tetrazoli um 四甲基偶氮唑蓝 NBS New Bovine Serum 新生牛血清 OD Optical Densit 光密度值 PBS Phosphate-buffered Saline 磷酸盐缓冲液 PI Propidium Iodide 碘化丙啶 PS Phosphatidylserine 磷脂酰丝氨酸 RGR Relative Growth Rate 细胞相对增殖率 3 反复熔铸对非镍基烤瓷合金细胞毒性的影响 及其机制的研究 【摘要】 目的：研究反复熔铸对钴铬、纯钛、钯基和金铂等 4 种非镍基烤瓷合金离子 析出、体外细胞毒性、细胞周期及细胞凋亡等生物相容性相关指标的影响。 方法：（1）将从厂家购买的上述 4 种烤瓷合金分别经过 1~3 次熔铸，即获 得分别经 1~3 次熔铸后的 4 种烤瓷合金的片状测试试件。每次熔铸后的烤瓷合金 在再次熔铸前均需经过“非镍基烤瓷合金再次熔铸前处理工艺”进行严格处理， 形成再次熔铸的原料。参照 ISO 10993-5:2009 标准要求，分别将上述 4 种烤瓷 合金的片状测试试件使用 DMEM 细胞培养液进行浸提；（2）使用电感耦合等离 子体原子发射光谱仪（ICP-AES）及分析软件分别检测上述 4 种烤瓷合金测试试 件浸提液中金属离子的种类和水平；（3）分别使用上述 4 种烤瓷合金测试试件的 浸提液培养小鼠肺结缔组织成纤维细胞（L-929），采用 CCK-8 法进行体外细胞 毒性试验检测浸提液对 L-929 细胞增殖的抑制情况，倒置相差显微镜观察 L-929 细胞的生长情况；（4）分别使用上述 4 种烤瓷合金测试试件的浸提液培养 L-929 细胞，碘化丙啶（PI）进行细胞染色，通过流式细胞仪检测各个实验组细胞周期 的改变；（5）分别使用上述 4 种烤瓷合金测试试件的浸提液培养 L-929 细胞， Annexi n-V-FITC/PI 进行细胞荧光双染，倒置荧光显微镜观察，流式细胞仪检测 细胞凋亡情况。 结果：（1）经过 1~3 次熔铸后除第 3 代钴铬烤瓷合金与第 1、2 代相比除镓 （Ga）的析出量增高外（P0.05），各代钴铬烤瓷合金之间其他金属离子的析出 量及金属离子析出的总量均无显著变化（P0.05）；经过 1~3 次熔铸后各代纯钛 烤瓷合金之间金属离子析出的种类和水平均无显著变化（P0.05）；经过 1~3 次 熔铸后第 3 代钯基烤瓷合金镓（Ga）的析出量较第 1 代与第 2 代增高（P0.05）， 第 3 代钯基烤瓷合金锌（Zn）的析出量较第 1 代与第 2 代降低（P0.05），各 代钯基烤瓷合金之间其他金属离子的析出量及金属离子析出的总量均无显著变 化（P0.05）；经过 1~3 次熔铸后第 2、3 代金铂烤瓷合金中均检出第 1 代未检 出的银（Ag）与钯（Pd）离子，第 2、3 代金铂烤瓷合金金属离子析