肺炎克雷伯菌ESBLs检测和KPC酶分析-病原生物学专业论文.docxVIP

PAGE PAGE 2 缩 略 词 表 缩略词 英文全称 中文全称 ESBLs KPC extended spectrum beta-lactamases Klebsiella pneumoniae carbapenemases 超广谱 β-内酰胺酶 肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶 CLSI Clinicaland Laboratory Standard Institute 临床实验室标准协会（美国） E.coli Escherichia coli 大肠埃希菌 ATM Aztreonam 氨曲南 AMP Ampicillin 氨苄西林 CFZ Cefazolin 头孢唑啉 CIP Ciprofloxacin 环丙沙星 CRO Ceftriaxone 头孢曲松 FD Furadantin 呋喃妥因 FEP Cefepime 头孢吡肟 GEN gentamycin 庆大霉素 IPM Imipenem 亚胺培南 LEV Levofloxacin 左旋氧氟沙星 SXT Sulfamethoxazole/Trimethoprim 甲氧苄啶/磺胺甲噁唑 CAZ Ceftazidime 头孢他啶 TOB tobramycine 妥布霉素 TIP Piperacillin/Tazobactam 哌拉西林/他唑巴坦 MIC minimal inhibitory concentration 最小抑菌浓度 MHT PCR Modified Hodge Test polymerase chain reaction 改良 Hodge 实验 聚合酶链反应 PFGE CLA pulsed-field gel electrophoresis Clavulanic acid 脉冲场凝胶电泳 克拉维酸 CTX Cefotaxime 头孢噻肟 CAZ/CLA Ceftazidime/Clavulanic acid 头孢他啶/克拉维酸 CTX/CLA Cefotaxime/Clavulanic acid 头孢噻肟/克拉维酸 肺炎克雷伯菌 ESBLs 检测和 KPC 酶分析 中文摘要 研究背景和目的： 随着广谱抗菌药物的广泛应用，尤其是三代头孢菌素的大量应用，产超广谱 β- 内酰胺酶（extended spectrum beta-lactamases, ESBLs）的肺炎克雷伯菌分离率有逐 年增加之势。ESBLs 主要由革兰阴性杆菌产生，是质粒介导的能水解多种 β-内酰 胺类抗生素的一类酶。ESBLs 可通过接合、转化、转导等形式使耐药基因在细菌 间扩散，造成严重的院内感染和耐药菌株的广泛传播。肺炎克雷伯菌对碳青霉烯 类抗生素非常敏感，然而随着碳青霉烯类抗生素（亚胺培南、美罗培南等）使用 增多也出现了耐药菌株。肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶（ Klebsiella pneumoniae carbapenemases, KPC）是近来新发现的一类碳青霉烯酶，能够水解包括碳青霉烯 类抗生素等多种 β-内酰胺类抗菌药物，并且 KPC 基因位于可转移性质粒上，使得 KPC 在菌株间传播。临床实验室应重视对产 ESBLs 和 KPC 菌株的检测和流行病 学监测，防止并控制由其引起的医院感染的暴发流行。本研究旨在了解我院肺炎 克雷伯菌耐药性和产 ESBLs 的发生率、最佳筛选底物，并对亚胺培南耐药的肺炎 克雷伯菌进行了 KPC 耐药基因型检测和分析，明确其耐药机制，为临床合理使用 抗生素提供依据。 方法： 对 2009 年 1 月-2010 年 10 月蚌埠医学院第一附属医院临床分离出的 124 株肺 炎克雷伯菌感染情况进行回顾性调查，并用 WHONET5.4 软件进行药敏分析，明 确其感染现状和耐药情况。选用头孢他啶、头孢噻肟、氨曲南、头孢曲松进行 ESBLs 表型初筛，双纸片协同确证试验检测产 ESBLs 菌株。通过改良 Hodge 实验（Modified Hodge Test, MHT）初筛产 KPC 酶肺炎克雷伯菌。聚合酶链反应（polymerase chain reaction, PCR）和测序鉴定耐药肺炎克雷伯菌是否带有 KPC 基因，并通过网上 GenBank 的比对确定 KPC 基因型。用脉冲场凝胶电泳（ pulsed-field gel electrophoresis, PFGE）技术对 KPC 阳性菌株进行同源性分析。质粒转移接合试验 确定 KPC 基因是否可以进行质粒转移。质粒转移后的接合子和原始的临床菌用琼 脂稀释法检测碳青霉烯类抗生素的最小抑菌浓度（minimal inhibitory concentration， MIC）。 结果： 肺炎克雷伯菌的分布以 ICU 的检出率较高，占 17.74%，感染部位以呼吸道为 主，占 37.90%。实验证明我院 ESB