葛根素预处理对大鼠脑缺血早期脑组织eNOS的影响及脑保护机制分析-病理学与病理生理学专业论文.docxVIP

PAGE PAGE 5 葛根素预处理对大鼠脑缺血早期脑组织 eNOS 的影响及脑保护机制研究 中 文 摘 要 目的 脑血管疾病是造成人类死亡和残障的主要原因，而且其发病率有逐 年增加之趋势，其中约 80%为缺血性脑血管疾病。内皮型一氧化氮合成酶 （eNOS）在大脑血液循环调节中起着重要作用，其活性增强可降低血管张 力。脑缺血时 eNOS 能增加脑血流量，特别是缺血半影区的脑血流量，保 护缺血半影区的脑细胞。我国传统中药葛根素对缺血脑组织的保护作用早 有报道，尤其是在脑缺血早期，但其作用机理尚未完全清楚。葛根素在脑 缺血早期的脑保护作用是否与上调脑组织 eNOS 表达有关？目前尚未见报 道。我们将就此开展研究，为临床防治脑缺血提供实验依据。 方法 动物模型：本研究将线栓从左侧颈总动脉插入，制作大脑中动脉栓 塞（MCAO）大鼠模型。动物分组：大鼠随机分为以下 3 组：假手术组（S 组、5 只）、脑缺血组（M 组、20 只）和葛根素预处理组（P 组、20 只）， 其中，P 组和 M 组又分别分为脑缺血 0.5h、1h、2h、4h 四个亚组（P0.5h、 P1h、P2h、P4h 和 M 0.5h、M 1h、M 2h、M 4h），每组 5 只。P 组均在手 术前 10min 腹腔注射葛根素(100mg/kg)，M 组和 S 组在同样时间点注射等 量生理盐水。取样及观察：各组大鼠分别于相应缺血时间点后被处死，其 中 S、M2h、M4h、P2h 和 P4h 组大鼠处死前进行神经功能缺损评分以评价 大鼠神经功能变化；各组大鼠均取脑行苏木素-伊红（HE）染色和神经元尼 氏体染色观察脑组织病理变化；采用免疫组化和 Western blot 方法检测脑组 织 eNOS，观察其蛋白质的分布和表达水平。 结果 神经功能缺损评分显示，P 组各亚组较对应时间点的 M 组各亚组均 减轻（P0.05）；HE 染色显示，P 组神经元损伤程度均较 M 组减轻；神经 元尼氏体染色显示，P 组神经元尼氏小体溶解均相对减少；免疫组化和 Western blot 检测显示，P 组各时间点脑组织 eNOS 蛋白质的表达均明显高 于对应时间点的 M 组，M1h 和 M2h 组明显高于 S 组（P0.05 或 P0.01）， 但 M0.5h（超早期）组脑组织 eNOS 蛋白质的表达增加不明显（P0.05）。 结论 1.MCAO 大鼠早期脑组织 eNOS 蛋白质表达水平有不同程度增加， 但超早期增加不明显。2.葛根素预处理可以在脑缺血超早期上调脑组织 eNOS 蛋白质表达，而且使 eNOS 蛋白质表达上调的持续时间延长，有效减 轻 MCAO 大鼠脑组织损伤。3. 葛根素预处理对大鼠脑缺血早期的脑保护机 制与它上调脑组织 eNOS 蛋白质表达有关。 关键词 脑缺血；葛根素；内皮型一氧化氮合酶；脑保护 THE EFFECT OF PEURARIN PRETREATMENT ON ENDOTHELIAL NITRIC OXIDE SYNTHASE IN BRAIN TISSUE AND PROTECTIVE MECHANISMS OF IT ON BRAIN IN THE EARLY STAGE OF CEREBRAL ISCHEMIA IN RAT ABSTRACT Objective Cerebrovascular diseases are still the major causes of leading death and disability. Moreover ,the morbility of the cerebrovascular diseases raises stepwise, about 80 percent of the cerebrovascular diseases are caused by cerebral ischemia. Endothelial nitric oxide synthase (eNOS) plays an important role in the regulation of the cerebral blood circulation. Up-regulating expression and/or activity of eNOS can vasodilate cerebral vessels and increase cerebral blood flow, especially in ischemic penumbra, and protect neurons from ischemic injury. Many studies have reported that puerarin ,a traditional C