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鳄鱼膏总氨基酸含量测定 　　摘 要:目的:测定鳄鱼膏中总氨基酸的含量。方法:采用茚三酮-分光光度法测定总氨基酸。结果:以甘氨酸为对照品作标准曲线，在2.0～4.5μg/ml范围内线性关系良好。加样回收率为100.63%，RSD为1.92%。测得5批鳄鱼膏中总氨基酸含量分别为21.74mg/g、21.84mg/g、21.97mg/g、21.72mg/g、22.02mg/g。结论:该方法简便、准确、灵敏，重复性好。 　　关键词：鳄鱼膏；总氨基酸；分光光度法；含量测定 　　中图分类号：R284.1文献标识码：A文章编号：1673-2197（2007）11-051-02 　　 　　鳄鱼，古称“鼍龙”，《本草纲目》对鼍甲、肉、脂、肝的功用均有叙述，称鼍肉（鳄鱼肉）“甘，有小毒”，“主少气吸吸，足不立地”，可见用鳄鱼肉治疗咳嗽哮喘，有中医理论依据和民间习用传统。《医林纂要》称鼍肉“用熬膏，溃坚拔毒，去瘀生肌”，提到了鳄鱼肉熬膏为药的用法。鳄鱼广泛分布于热带、亚热带的海滨及河湖沼泽中，以东南亚、澳洲北部为多。本实验所用鳄鱼膏是由人工饲养的湾鳄（Crocodylus porosus ）肉经生物技术酶解的产物，有效地保留了各类有机成分,是研制鳄鱼系列保健品的必备中间体。现代研究表明，鳄鱼肉含有丰富的优质蛋白质、不饱和脂肪酸、维生素及多种微量元素，还富含人体必需的9种氨基酸，含量高于猪、鸡、鸭等肉类。[1]本文对鳄鱼膏所含总氨基酸进行了含量测定，方法简便、准确。 　　 　　1 仪器和试药 　　 　　UV-2401型紫外分光光度计（岛津）、752型紫外可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司）、电子天平（上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂）、PHS-3C型酸度计(上海虹益仪器仪表有限公司)。甘氨酸为对照品（中国药品生物制品检定所），茚三酮、磷酸二氢钾、氢氧化钠、乙醇等均为分析纯。 　　 　　2 方法和结果 　　 　　2.1 溶液的配制 　　2.1.1 茚三酮溶液的配制 称取茚三酮1.00g，加乙醇使溶解成50ml，即得2%茚三酮溶液。 　　2.1.2 磷酸盐缓冲液的配制 取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液25ml，加0.2mol/L氢氧化钠溶液11.8ml，用水稀释至100ml，摇匀，即得，用酸度计测得缓冲液pH值为6.80。 　　2.1.3 甘氨酸对照品溶液的制备 称取干燥的甘氨酸对照品0.1000g，用蒸馏水溶解、定容至100m1，即得1.0mg/ml甘氨酸对照品溶液。 　　2.1.4 供试品溶液的制备 取样品4g，加70%乙醇40ml，回流提取2次，每次2小时。合并滤液，回收乙醇，用蒸馏水定容至100ml容量瓶中。 　　2.2 实验条件的选择 　　2.2.1 最大吸收波长的确定 　　取两支试管，分别量取甘氨酸对照品溶液、供试品溶液0.5ml，加蒸馏水至5ml，再加茚三酮溶液和磷酸盐缓冲液各1ml，摇匀。另取一支试管，量取蒸馏水5ml，加茚三酮溶液和磷酸盐缓冲液各1ml，摇匀，作为试剂空白液。将3支试管置于100℃水浴加热15min，取出冷却。15min后，在UV-2401型紫外分光光度计中进行波长扫描。结果显示对照品和样品溶液均在567nm处有最大吸收。因此，确定本实验的最佳测定波长为567nm。 　　2.2.2 标准曲线的绘制 　　精密量取1.0mg/ml甘氨酸对照品溶液0.00、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45ml，各加2%茚三酮溶液和pH=6.8的缓冲液1ml，摇匀，100℃水浴加热15min，取出冷却，用蒸馏水定容至100ml。15min后，在567nm处测量吸收度，以甘氨酸浓度（mg/ml）为横坐标，吸收度为纵坐标，绘制标准曲线（见图1）。回归方程为y=200x-0.1817(R2=0.9993)。表明甘氨酸在2.0～4.5μg/ml范围内，呈良好的线性关系。 　　 　　2.3 精密度考察 　　精确吸取甘氨酸对照品溶液0.30ml，按2.2.2所示方法操作，连续5次测定其吸光度，结果见表1。 　　 　　2.4 重复性试验 　　取批号为070605的样品5份，按2.1.4所示方法平行操作，制成供试品溶液，再按2.2.2所示方法测定吸收度。结果为RSD=2.13%，表明同一份样品在相同条件下测定的结果重复性较好。 　　2.5 稳定性试验 　　取批号为070605的供试品溶液1.0ml，按2.2.2所示方法在567nm处每隔5、10、15、30、45、60min测定一次吸收度，结果为0.685，0.685，0.684，0.682，0.680，0.679。显示吸收度随时间推移呈缓慢减小的趋势，但RSD=0.38%，说明在中止反应后1小时内测定结果稳定。