stat3在斑马鱼侧线毛细胞顺铂损伤中的表达及意义耳鼻咽喉科学专业论文.docxVIP

＼嗍燮掣STAT3在斑马鱼侧线毛细胞顺铂损伤中的 ＼嗍燮掣 STAT3在斑马鱼侧线毛细胞顺铂损伤中的 表达及意义 硕士研究生：陈飒 指导教师：龙孝斌教授 张文清教授 摘要 背景 已知鱼类内耳突变基因中约1／3与人类综合征性和非综合征性耳聋有关。 斑马鱼(zebrafish)作为一种重要的脊椎动物模式生物，虽然没有外耳和中耳， 但具有脊椎动物典型的内耳结构，其内耳毛细胞组织形态和分子构成均与哺乳 动物内耳毛细胞极为相似【11。此外，斑马鱼拥有另一感觉神经器官——侧线系 统，其由数十个神经丘组成，每个神经丘包含一簇感觉毛细胞。且斑马鱼具有 个体小、养殖简易、体外受精、体外发育、胚胎透明、繁殖能力强、生殖周期 短、品系繁多等特点。因此斑马鱼作为研究内耳发育和药物耳毒性的模式生物 具有明显优势。 顺铂为第一代临床化疗铂类药物之一，在治疗鼻咽癌等头颈部恶性肿瘤中 发挥着重要作用[21。然而顺铂在治疗肿瘤的同时，也会对机体产生不同程度的 毒副作用。据报道接受顺铂化疗的恶性肿瘤患者中，约93％出现渐进性或不可 逆性感音神经性聋，严重影响患者生活质量。为深入了解顺铂耳毒性的特点、 产生机制、药物预防以及损伤后毛细胞再生情况，许多学者采用不同动物模型 及体外实验并取得了一定研究成果，但顺铂对内耳毛细胞的损伤机制目前仍不 十分清楚。很多研究已经证明，顺铂引起耳毒性作用的重要机制包括氧化应激、 万方数据 摘要DNA损伤以及炎症因子(IL．6、IL．8、TNF-a等)的分泌等【3】o 摘要 DNA损伤以及炎症因子(IL．6、IL．8、TNF-a等)的分泌等【3】o 活性氧类(Ros)是在机体代谢过程中产生的一类含氧的化学活性分子， 包括氧离子、氧自由基、过氧化氢等。正常情况下，机体产生一定量的ROS，ROS 会参与细胞信号转导过程，对维持机体稳态有重要作用。但是当机体受到刺激 产生过量活性氧时，高水平的活性氧则会破坏细胞和基因结构【4】。 中性粒细胞捕获机制(NETs)是近些年新发现的一种中性粒细胞抗感染机 制。不仅如此，在自身免疫性疾病、肿瘤、血栓性疾病中也发现了NETs机制 的参与，对机体产生不利的影响。 STAT3是信号转导与转录激活因子家族家族(STATs)中重要的～员，它 是一种脱氧核糖核酸结合蛋白，具有信号转导和转录调控功能，是JAK．STAT 信号通路的重要环节(5j。正常组织细胞中，STAT3主要参与细胞的增殖、分化 和凋亡等过程。生长因子、细胞因子等多肽类配体在细胞表面与相应的受体结 合，受体在胞浆内与受体型酪氨酸蛋白激酶JAKs相结合，受体上的酪氨酸残 基磷酸化并使使JAKs活化；活化的JAKs和受体募集细胞浆内的STAT3，并激 活STAT3。STAT3上的SH2结构域与受体上的酪氨酸磷酸化位点结合，在胞浆 内形成同源或异源二聚体；二聚体进入胞核，与在靶基因启动子内的特殊DNA 序列结合，诱导相应基因表达。另外，某些STAT3蛋白的激活区是丝氨酸残基。 通过此过程，STAT3将配体激发的短暂信号转化为基因表达的改变，调控细胞 的多种生理功能。正常情况下，STAT3的激活时间短暂且非常迅速，但是当 STAT3蛋白持续表达，则可能导致多种肿瘤的发生[6】。研究证明很多头颈部肿 瘤细胞中STAT3表达量较正常组织细胞明显升高，JAK激酶抑制剂、STAT3信 号通路抑制剂、STAT3诱骗寡核苷酸、表皮生长因子受体和某些天然生物制剂 等可作用于STAT3信号转导通路并降低STAT3下游某些基因的表达从而诱导肿 瘤细胞的凋亡。 目前已经证明STATs家族中的STATl和STAT6在顺铂导致的毛细胞损伤中被 激活，并且分别抑制Sn盯1和STAT6后，顺铂对毛细胞的损伤将减弱。STAT3在 II 万方数据 硕士学位论文促进细胞增殖方面已经有大量研究，然而其在细胞凋亡过程中的研究尚不多见。 硕士学位论文 促进细胞增殖方面已经有大量研究，然而其在细胞凋亡过程中的研究尚不多见。 有研究证明，STAT3在肾缺血再灌注损伤中表达增多‘71。本文主要探讨STAT3在 顺铂导致的斑马鱼侧线毛细胞损伤中表达情况，并用STAT3抑制剂干扰，我们证 明了s仉玎3在顺铂导致的斑马鱼侧线毛细胞损伤中被激活，并且抑制STAT3后， 顺铂对斑马鱼侧线毛细胞的损伤有所减弱。利用特异性标记中性粒细胞的转基 因斑马鱼Tg(1yz：DsRed)观察到，顺铂损伤侧线毛细胞的过程中，中性粒细胞向 神经丘移动的现象，据测推测中性粒细胞可能参与了顺铂对毛细胞的损伤过程。 目的 建立幼年斑马鱼侧线毛细胞顺铂损伤模型；研究STAT3在幼年斑马鱼侧线 毛细胞顺铂损伤中的作用。 研究内容及方法 1．顺铂损伤幼年斑马鱼侧线毛细胞及损伤后毛细胞数量和凋亡信号检测 1．1顺铂处理受精后第5天(5dpf