降纤酶对实验性变态反应性脑脊髓炎保护作用的研究-神经病学专业论文.docxVIP

降纤酶对实验性变态反应性脑脊髓炎保护作用的研究摘要 降纤酶对实验性变态反应性脑脊髓炎保护作用的研究 摘要 目的：通过观察降纤酶(DF)对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE) 大鼠发病情况、脑及脊髓病理改变、纤维蛋白沉积、活化星形胶质细胞、 基质金属蛋白酶．9(MMP．9)的表达、血脑屏障(BBB)的功能、脑组 织匀浆肿瘤坏死因子．0【(n师．伐)含量、血浆组织型纤溶酶原激活剂 (tPA)、纤溶酶原激活物抑制剂(PAl)水平的影响，探讨DF对EAE的 保护作用及其可能的免疫学机制，为治疗多发性硬化(MS)寻找新的 药物。方法：1．分组、造模及给药：采用粗制碱性髓鞘蛋白(CMBP)加福 氏完全佐剂(CFA)皮下注射的方法建立EAE模型，EAE模型分为DF高、 中、低剂量治疗组和EAE对照组，每组l O只；正常对照组lO只，按EAE 模型组的方法注射生理盐水及CFA。自造模前一周开始给药，正常对照 组及EAE对照组腹腔注射生理盐水0．3ml／d，DF低、中、高剂量治疗组分 别按4u／kg．d、8u／kg．d、16u／kg．d剂量行腹腔注射，连续注射十天，于EAE 对照组、DF各治疗组连续3天症状评分无加重或四肢瘫痪、死亡时作为 EAE发病高峰期处死发病大鼠，濒死大鼠在尚有心跳、体温时处死，其 余至观察8周结束时全部处死。2．观察大鼠发病情况、潜伏期、进展期 和高峰期神经功能障碍评分及死亡率的变化。3．采用光镜观察各组大鼠 脑及脊髓组织病理变化。4．采用免疫组化染色法检测脑组织MMP．9阳性 表达，计数阳性细胞数；抗纤维蛋白原(Fig)、抗胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)免疫组化染色分别检测纤维蛋白沉积、活化星形胶质细胞的 表达，并计算Fig免疫组化阳性面积、GFAP的平均光密度值(IOD)，观 表达，并计算Fig免疫组化阳性面积、GFAP的平均光密度值(IOD)，观 察DF对纤维蛋白沉积、星形胶质细胞反应、MMP．9表达的影响。5．测定 血清和脑脊液中蛋白含量，并计算血清与脑脊液蛋白含量比值(QA)，通 过QA评定BBB的功能。6．采用ELISA法检测脑组织匀浆TNF．0【的含量、 血浆tPA和PAI的水平。7．将EAE对照组和DF低、中、高剂量治疗组各指 标进行相关性分析。8．所有数据采用SPSSl7．0进行统计分析。结果：1． 大鼠发病情况：(1)临床症状：正常对照组大鼠无异常表现；EAE对照 组及DF高、中、低剂量治疗组所有的大鼠均发病，潜伏期10．30天不等， 发病大鼠先后出现进食减少、体重下降、萎糜、后肢无力、自伤后肢、 后肢完全不能活动等表现，严重者四肢瘫痪、抽搐，甚至死亡。(2)潜 伏期变化：DF各治疗组的潜伏期较EAE对照组延长(尸均0．01)；高、中 剂量治疗组较低剂量组延长(氏O．01、P0．05)，高剂量治疗组潜伏期较 中剂量治疗组延长(氏O．01)。(3)进展期变化：DF各治疗组进展期与EAE 对照组相比明显缩短(P均0．01)；DF高剂量治疗组较低剂量治疗组明显 缩短(氏O．05)。(4)发病高峰期神经功能障碍评分变化：DF各治疗组发 病高峰期神经功能障碍评分较EAE对照组明显降低伊均0．01)；高、中 剂量治疗组较低剂量治疗组降低(尸0．01、P0．05)，DF高剂量治疗组较 DF中剂量治疗组降低(尸O．05)。(5)死亡率：DF高、中剂量治疗组死亡 率分别I：LEAE对照组、DF低剂量治疗组明显降低(户均O．05)，而DF低剂 量治疗组死亡率LhEAE对照组低，但差异无统计学意义(尸0．05)，DF高、 中剂量治疗组死亡率比较无统计学差别(胗O．05)。2．脑及脊髓病理变化： EAE对照组及DF高、中、低剂量治疗组大鼠的脑和脊髓都出现了EAE 典型的病理改变，小血管周围炎性细胞浸润，呈袖套状的改变，血管周 典型的病理改变，小血管周围炎性细胞浸润，呈袖套状的改变，血管周 围白质明显的脱髓鞘改变。DF各治疗组脱髓鞘改变及炎性细胞浸润较 EAE对照组减轻；高、中剂量治疗组较低剂量治疗组减轻，高剂量治疗 组病理改变最轻。3．免疫组化结果：(1)纤维蛋白沉积：正常对照组大 。鼠脑组织未见到纤维蛋白沉积。而EAE对照组及DF各治疗组大鼠脑组织 白质的大、小血管周围、内皮细胞、神经胶质细胞胞浆中均可见到明显 的Fig阳性物质沉积，其沉积的范围远远大于炎性细胞浸润的范围。而 DF低剂量治疗组大鼠脑组织血管周围可见Figlj日性物质沉积，而胶质细 胞胞浆中未见Fig阳性物质；DF中剂量治疗组血管周围可见少量Fig阳性 物质沉积；DF高剂量治疗组发病大鼠Fig阳性物质沉积减少最明显。(2)一 活化的星形胶质细胞：正常对照组未见活化的星形胶质细胞；EAE对照 组GFAP阳性细胞呈阳性表达，呈弥漫性分布，血管周围反应更强；D