结核杆菌耐药性及其分子流行病学研究-流行病与卫生统计学专业论文.docxVIP

华中科技大学周济医学院 华中科技大学周济医学院 硕士学位论文 中文摘要 结核病是一个古老的、在全球广泛流行的传染病，迄今仍然是威胁人民健康的 重要公共卫生问题，而且可能是一个阻碍社会和经济发展的社会问题。自1882年 K O C h氏发现结核菌以来，全球已有2亿人死于结核病，现在全球约2 0亿的人 口受到结核菌感染，结核病例有2000万。传统的流行病学依靠收集病人的病史、患 者提供的社会接触史和实验室的生化结果，难以准确回答结核病的传播机理和正确 鉴别不同病人分离菌株的相互关系。分子流行病学的发展为进一步理解结核病在世 界范围内的传播提供了可靠的分子证据，可以准确追踪传染来源，了解结核杆菌之 间的关系和发展进化史，具有很好的实用价值。本次研究利用限制性片段长度多态 性RFLP分析127株来自中国南方城市深圳的结核病例分离的结核杆菌菌株的分子特 ‘征，以达到了解深圳以至中国南方地区结核病分子流行病学特征是主要目的之一。 L ／分以下三部分进行： ＼土 第一部分 结核杆菌药物敏感性测定 目的：了解临床分离的结核分枝杆菌对四种一线抗结核药物(HSRE)的耐药情 况。方法：参照《结核病诊断细菌学检验规程》推荐的绝对浓度法和BACTEC TB 460 检测仪进行药敏试验，接种含一定浓度药物的罗氏培养基及12B培养瓶和不含药培 养基，观察生长状况判断耐药与否。结果：(1)两法检测结果一致。实验的2000—2001 年127株临床结核杆菌耐HSRE至少一种药物的有39株。其中单耐一种药物H，S，R， E分别为4，9，7，2株；耐两种药物HS 8株。SR 1株；耐三种药物HSR 4株，HRE l 株；耐HSRE四药有3株。(2)总耐药率30．7％；其中单耐药率为17．3％，耐多药率6．3％。 (3)未发现耐药在不同年龄组分布的差异。结论：深圳市结核杆菌耐药率较高。 第二部分 耐多药结核分枝杆菌最低抑菌浓度测定 目的：了解耐多药结核分枝杆菌对其他10种药物的敏感性。方法：采用快速变 色液体培养基，其中对照孔不含药，测试孔含药浓度倍比稀释为128崦／ml至 0．125“g／ml。接种结核分枝杆菌后加入显色剂，不变色表示结核分枝杆菌生长受到 抑制。以不变色的最低药物浓度孔值为最低抑菌浓度(MICs)。结果：(1)所有测试菌 株至少对一种药物低敏感，最多达到六种。(2)低度敏感率(MIC≥64腿／m1) 37％(37／100)，高度敏感率(MIC≤2瞻／m1)5496(54／100)，余下9％为中度敏感(4扯g／ml ≤MIC≤32斗g／m1)。(3)结构类似药物间的交差耐药不明显。三种喹诺酮药物测试结 1 华中科技大学同济医学院 华中科技大学同济医学院 硕士学位论文 果一致的仅一株，三种大环内酯类药物结果一致的也仅三株a(4)克拉霉素，左氧氟 沙星，乙硫异烟胺的MIC几何平均值分别为0．5，I，lp．g／ml，显示出较好的活性a 结论：耐多药结核分枝杆菌对多种非一线抗结核药物的敏感性较低，可供选择的抗 结核药物谱较窄。 第三部分 结核病分子流行病学研究 目的：使用标准化的限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)分析深圳市结核分枝 杆菌的分子流行病学特征。方法：(1)使用标准化的RFLP法检测并分析从127位患 者分离的结核分枝杆菌IS6110指纹多态性。(2)对所有病例开展一线药物敏感性监 测。(3)调查所选病患者的基本情况，社会人口学及流行病学资料。(4)分析结核分 枝杆菌IS6110指纹多态性特征与流行病学以及药敏的关系。结果 (1)根据IS6110 指纹特征的同源性的高低，可以将所检测的127株结核分枝杆菌基本分为A，B，c，D 4族，四族的株数和比例分别为50、39．4％，12、9．4％，16、12．6％，49、38．6％。(2)各 族菌株的IS6110指纹特征：A族菌株间相似系数在70％以上，共同拥有 1．3kb，1．9kb，2．ikb，2．7kb，3．3kb，4．5kb，5．Okb，6．5kb等位置的条带，与被称为“北 京基因型”的菌株相似，属于“北京家族”；8族菌株间相似系数也在70％以上，与 A族菌株族间相似系数较高，为65％，与A族相比，L 9kb以上条带与A族相似，但 缺乏1．9kb以下的条带；C族带型分布散且较为平均，在1．3kb，2．2kb，3．3kb，5．5kb 等位置都有共同拥有的片段；D族菌株条带数目少，呈现高度多态性，所有菌株之间 没有相同位置的条带，相互间同源性较低。其中A，B，c三族相似系数在55％以上， 且有相同位置的片段，将它们称为“成族菌株”。无共同条带的D族称为“不成族 菌株”。(3)30岁以上人群“不成族菌株“所占比重高于30岁以下人群，低年龄组 “成族菌株”比例高，近期传播结核较为严重。(4)检测菌