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石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明
学位论文独创性声明
本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除 文中已经注明引用的内容外 ,本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究 做出重要贡献的个人和集体,均已在文中作了明确的说明并表示谢意。
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使用授权声明
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I
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摘要
目的:探讨研究不同毒力的结核分枝杆菌对感染宿主巨噬细胞应激的调控作用及其机制。
方法:1 以结核分枝杆菌国际标准强毒株 H37Rv 菌株(简称 H37Rv 菌株)和卡介苗菌株(简称 BCG 菌 株)分别感染小鼠巨噬细胞(RAW264.7),在感染 1、6、12 及 24 小时后,分别采用化学比色法检测各组 感染巨噬细胞的超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮合酶(NOS)的活性及丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO) 含量的测定。2 采用免疫印迹技术检测各组感染巨噬细胞的 Cu/Zn-SOD 和 iNOS 蛋白的表达。3 采 用 RT-PCR 方法检测各组感染巨噬细胞的 Cu/Zn-SOD 和 iNOS 基因的表达( mRNA 水平)。
结果:1 采用化学比色法检测各组感染巨噬细胞的 SOD 和 NOS 活性及 MDA 和 NO 含量的测定:BCG 菌株感染 RAW264.7 后细胞内 SOD、NOS 活性和 NO 含量逐渐升高,而 MDA 含量逐渐下降,与对照 组比较差异有统计学意义(P0.05);H37Rv 菌株感染 RAW264.7 后细胞内 SOD、NOS 和 NO 含量逐 渐下降,而 MDA 含量逐渐增加,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。2 采用免疫印迹技术检测 各组感染巨噬细胞的 Cu/Zn-SOD 和 iNOS 蛋白的表达:BCG 菌株感染 RAW264.7 后细胞内 Cu/Zn-SOD 表达逐渐升高,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);H37Rv 菌株感染 RAW264.7 后细胞内 Cu/Zn-SOD 表达逐渐下降,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。空白对照组、BCG 菌株组、 H37RV 菌株组感染 RAW264.7 后细胞内 iNOS 蛋白的表达无差异,为了进一步研究不同毒力结核分枝 杆菌感染巨噬细胞的 iNOS 的蛋白表达差异,我们将对 iNOS 基因表达分析。3 采用 RT-PCR 方法检测 各组感染巨噬细胞的 iNOS 和 Cu/Zn-SOD 基因的表达(mRNA 水平):BCG 菌株感染 RAW264.7 后细 胞内 Cu/Zn-SOD mRNA 和 iNOS mRNA 水平逐渐升高,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05); H37Rv 菌株感染 RAW264.7 后细胞内 Cu/Zn-SOD mRNA 和 iNOS mRNA 水平逐渐下降,与对照组比 较差异有统计学意义(P0.05)。
结论:1 结核分枝杆菌感染宿主巨噬细胞导致巨噬细胞应激,感染巨噬细胞的应激与菌株毒力强弱有 关。2 低毒力的结核分枝杆菌对宿主巨噬细胞应激发挥诱导作用。3 高毒力的结核分枝杆菌对宿主 巨噬细胞应激发挥抑制作用。
关键词:结核分枝杆菌;巨噬细胞;应激;调控;机制 论文类型:A(基础研究)
II
II
ABSTRACT
Objective:To study the function and mechanism of regulating and controling that different virulence of
mycobacterium tuberculosis reacts at the stress of infected host macrophages.
Methods:1 RAW264.7 were infected respectively bacterial suspension of the international standard virulent strain of Mycobacterium tuberculosis H37Rv strains (H37Rv) and Bacillus Calmette-Guérin strains (BCG).To detect respectively activity of superoxide
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