遗传物质的分子结构性质和功能.ppt

端粒酶RNA、核酶 端粒：真核生物染色体末端的蛋白质－DNA结构，其功能是完成染色体末端的复制，防止染色体融合、重组或降解。 端粒酶：一种自身携带模板RNA的逆转录酶，催化端粒DNA的合成。 端粒酶RNA：作为合成端粒DNA模板的核RNA，是端粒酶的组成部分，对端粒酶的结构和催化活性是必须的。 核酶：和通常的蛋白质酶一样，可以催化各种生化反应。 第四节 核酸的变性、复性与杂交 (1) 核酸的变性 核酸的变性是指核酸双螺旋区的多聚核苷酸链间的氢键断裂，变成单链结构的过程。变性核酸将失去其部分或全部的生物活性。核酸的变性并不涉及磷酸二酯键的断裂，所以它的一级结构(碱基顺序)保持不变。 能够引起核酸变性的因素很多。温度升高、酸碱度改变、甲醛和尿素等的存在均可引起核酸的变性。 RNA本身只有局部的双螺旋区，所以变性行为所引起的性质变化没有DNA那样明显。 利用紫外吸收的变化，可以检测核酸变性的情况。 例如，天然状态的DNA在完全变性后，紫外吸收(260 nm)值增加25－40%. 而RNA变性后，约增加1.1%。这种现象称为增色效应. DNA变性的特征 DNA的变性过程是突变性的，它在很窄的温度区间内完成。因此，通常将引起DNA变性的温度称为熔点，用Tm表示。 一般DNA的Tm值在70-85?C之间。DNA的Tm值与分子中的G和C的含量有关。 G和C的含量高，Tm值高。因而测定Tm值，可反映DNA分子中G, C含量，可通过经验公式计算： （G+C)%=(Tm-69.3)X2.44 DNA变性 当DNA的稀盐溶液加热到80-100℃时，双螺旋结构即发生解体，两条链彼此分开，形成无规线团。 DNA变性后，它的一系列性质也随之发生变化，如紫外吸收(260 nm)值升高, 粘度降低等。 (2) 核酸的复性 变性DNA在适当的条件下，两条彼此分开的单链可以重新缔合成为双螺旋结构，这一过程称为复性。DNA复性后，一系列性质将得到恢复，但是生物活性一般只能得到部分的恢复。 DNA复性的程度、速率与复性过程的条件有关。 将热变性的DNA骤然冷却至低温时，DNA不可能复性。但是将变性的DNA缓慢冷却时，可以复性。分子量越大复性越难。浓度越大，复性越容易。此外，DNA的复性也与它本身的组成和结构有关。 DNA复性 (3) 核酸的杂交与应用 核酸的杂交是指序列互补单链的RNA和DNA，或异源DNA、异源RNA之间，根据碱基配对原则，借助氢键相连而形成双链杂交分子的过程。 核酸的杂交在分子生物学和遗传学的研究中具有重要意义。 核酸的杂交 核酸杂交的应用 核酸探针的定义：带有检测标记的能够与靶分子特异性的相互作用的一段核酸分子。 Southern印迹（DNA－DNA） Northern印迹（DNA－RNA） 原位杂交（探针－组织或细胞中的DNA或RNA） 第五节 病毒核酸 一、病毒的基本概念 二、病毒核酸的一般特征 一、病毒的基本概念 病毒就是一类由蛋白质外壳和DNA组成的专属性的细胞内寄生物，不能进行独立的能量及遗传物质代谢，只能依靠寄主繁殖的非细胞生物。 * * * 为催化DNA拓扑学异构体相互转变的酶之总称。催化DNA链断开和结合的偶联反应，为了分析体外反应机制，用环状DNA为底物。在闭环状双链DNA的拓扑学转变中，要暂时的将DNA的一个链或两个链切断，根据异构体化的方式而分为二个型。切断一个链而改变拓扑结构的称为Ⅰ型拓扑异构酶（top- oisomeraseⅠ），通过切断二个链来进行的称为Ⅱ型拓扑异构酶（topoisomeraseⅡ）。属于Ⅰ型的拓扑异构酶，有大肠杆菌的ω蛋白（ω-protein，由分子量11万的单个多肽链所成）及各种真核细胞中存在的切断-结合酶（nicking-closing enzyme，分子量约6万5千—7万的及分子量约10万的）。Ⅱ型拓扑异构酶，有存在于细菌中的DNA促旋酶、噬菌体T4的拓扑异构酶Ⅱ以及真核细胞中依赖ATP的拓扑异构酶Ⅱ等。另外，噬菌体λ的irt基因产物和噬菌体φX174的基因A的产物等也具有切断—结合酶的活性，可认为是拓扑异构酶之一种。Ⅰ型拓扑异构酶不需要ATP的能量而催化异构体化，作为反应的中间产物，在原核生物来说是游离型的5′-OH末端扣3′-磷酸末端与酶形成共价键，而真核生物是3′-OH末端5′-磷酸末端与酶形成共价键。此酯键中所贮存的能量，可能在切断端的再结合上起着作用。Ⅰ型拓扑异构化酶催化的反应有下列各种：使超螺旋DNA在每一切断—结合反应中，使L数（参见DNA拓扑学异构体）发生一种变化，即松弛（relaxation）（图1）。将互补的单链环状DNA转变成具有螺旋结构的双链环状DNA（图 2），使单链DNA打结（topological knot）或解结（图3）。另外在二个环状