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戊己丸活性代表成分在大鼠肝脏中分布探究 ［摘要］采用L9 (34)正交设计将戊己丸中黄连，吴 茱萸，白芍提取物组成9组配伍方，以及相应剂量的单味药 方，共计18个方。建立并采用UPLC-MS/MS方法测定并比较 不同配伍方代表成分小糜碱、巴马汀、吴茱萸碱、吴茱萸次 碱、芍药昔在大鼠口服给药2 h后在肝脏中的浓度比较戊己 丸不同配伍方中有效成分在大鼠肝脏中的浓度。结果显示戊 己丸配伍方中有效成分在肝中的浓度与相同剂量的单味药 组方存在明显差异，相同剂量配伍方之间也存在差异。黄连 与低、高剂量吴茱萸中吴茱萸碱浓度成正相关，吴茱萸与低 剂量黄连中小槃碱的浓度成负相关，与中剂量黄连中小槃碱 的浓度成正相关，与中剂量白芍中芍药昔浓度成正相关。白 芍与中剂量黄连中巴马汀浓度成负相关、与中剂量吴茱萸中 吴茱萸碱、吴茱萸次碱浓度成负相关。提示了黄连、吴茱萸、 白芍之间相互作用导致了各活性成分在肝中分布的差异，分 析显示各代表成分2 h在肝中浓度最大的配伍比为 12 ： 6 ： 6o ［关键词］戊己丸；配伍；肝脏分布 戊己丸是临床上治疗肠易激综合症、胃溃疡等消化道疾 病的常用方剂，是收录于2010年版药典中的经典名方，其 在《幼幼新书》、《太平惠民合剂局方》、《医方考》等历代医 书中均有记载。戊己丸由黄连，吴茱萸和土炒白芍3味药组 成，然历代医书中记载的戊己丸配伍比例却不尽相同，2010 年版药典收录戊己丸由黄连-吴茱萸-土炒白芍6 ： 1 ： 6组 成［1］。有研究表明，戊己丸配伍不同，其药效也不尽相同。 王娅杰等［2］通过比较戊己丸提取物黄连-吴茱萸-白芍 12 ： 2 ： 3与12 ： 1 ： 12的优选方对豚鼠离体结肠运动的影 响，发现二者均可抑制乙酰胆碱诱导的结肠运动亢进，却呈 现出不同的作用特点和优势。宫海民等［3］比较了 2种不同 配伍比例的戊己丸的药效，发现黄连-吴茱萸-白芍1 ： 1 ： 1 时长于镇痛，5 ： 1 ： 1时长于抗炎。为此，本课题组采用药 代动力学的技术和手段，通过研究和比较戊己丸不同配伍组 方有效成份在体内的吸收和处置情况，探究各单味药之间的 相互作用和配伍规律，进而阐释戊己丸的配伍原理及机制。 肝是机体的最重要的代谢器官。课题组前期通过血药浓 度-时间曲线［4］以及体外肝微粒CYP450酶代谢模型［5-6］、 肝灌流模型［7］研究发现，戊己丸配伍不同，体内的药代动 力学参数、对肝中CYP450酶的影响以及肝脏对各代表成份 的摄取均存在明显的差异。然而，药物通常要分布到肝实质 细胞里才能跟细胞内的代谢酶发生相互作用（生物转化或影 响代谢酶活性）抑或通过胆汁排泄［8］。因此，了解药物在 肝脏中的分布有着重要意义。 本实验在之前研究的基础上，采用正交设计，将戊己丸 三味药的提取物组成不同配伍方，以期通过研究各配伍方的 在肝中的分布特征，更为深入的了解药物在肝脏乃至体内的 处置过程，同时冀求从分布的角度探索戊己丸配伍的规律及 意义，为更深入的研究戊己丸的配伍机制提供基础。 1材料 1.1动物 雄性 Sprague-Dawley 大鼠，SPF 级，体重（220±20） g, 中国食品药品检定研究院实验动物资源研究所提供，合格证 号SCXK （京）2009-0017o在恒温，光照周期12 h ： 12 h环 境中饲养3 d后实验。 2仪器 超高效液相色谱-质谱联用仪（Waters Xevo TQ MS-AcquityUPLC System , Masslynx V4. 1 工作 站）； MSU225S-000-DU型1/10万电子分析天平（德国Sartorius 公司）；Potter S型匀浆机（德国Sartorius公司）；VX-III 型多管涡旋振荡器（北京踏锦科技有限公司）；NA-5L型氮空 一体机（北京中兴汇利科技发展有限公司）；Centrifuge 5424R型低温高速离心机（德国eppendorf公司）；M订li-Q Advantage A10超纯水系统（美国M订lipore公司）。 1.3试剂与试药 盐酸小槳碱（Ber,批号110713-201212）,盐酸巴马汀 （Pal ,批号 110732-201108 ）,吴茱萸碱（Evo,批号 110802-200606）,吴茱萸次碱（Rut,批号 110801-201006）, 芍药昔（Pae,批号110736-201136）,盐酸苯海拉明（Dip, 批号 100066-200807）,梔子昔（Gar,批号 110749-200714）, 对照品均购自中国食品药品检定研究院。乙睛，甲醇，甲酸 均为色谱纯（美国Fisher公司）。高纯水（自制）。 黄连提取物、吴茱萸提取物、白芍提取物由中日友好医 院药剂室提取，得率分别为19. 3%, 17. 7%, 9.