钙 磷对奶牛rtecs目中stc-1mrna和蛋白表达的影响.docxVIP

钙磷对奶牛RTECs中STC．1 钙磷对奶牛RTECs中STC．1 mRNA和蛋白表达的影响 摘 要 奶牛钙磷代谢紊乱类疾病是奶牛主要疾病之一，此类疾病目前对奶牛养殖危害 很大，严重影响奶牛场的经济效益。近年来国内外钙磷代谢紊乱类疾病的研究主要 集中在甲状旁腺素(PTH)、活性维生素D、降钙素、胰岛素样生长因子(IGF．1)、骨钙 素(oc)等方面。 斯钙素(Stannioealcin， STC)是一种糖蛋白激素，最早在硬骨鱼体内发现，随 后在人、小鼠等多种哺乳动物中发现STC的存在。目前已证实STC．1参与调节体 内钙磷的稳态。因此本实验设计研究STC．1与奶牛钙磷代谢之间的关系，以提供更 多的奶牛钙磷代谢紊乱疾病方面的相关理论。本实验从以下三方面进行了研究： 1．奶牛RTECs的培养 采初生奶牛肾脏皮质做奶牛肾小管上皮细胞的原代培养及传代培养，并用免疫 组化方法进行细胞鉴定。细胞鉴定结果显示所培养细胞为奶牛肾小管上皮细胞，且 通过纯化和传代，得到稳定纯净的奶牛肾小管上皮细胞。 2．钙、磷对奶牛RTECs中STC．1 mRNA表达的影响 参照细胞增殖曲线用对数生长期细胞添加钙、磷影响因子进行分组培养，钙、 磷影响因子各分为对照组，100 pmol／L、500 pmol／L、1000 lamol／L和5000}tmol／L 五个不同浓度。分别在6 h、12 h、24 h、48 h提取各组的总RNA，利用荧光定量 PCR方法检测钙、磷对STC一1 mRNA的影响。 荧光定量PCR结果显示：在奶牛肾小管上皮细胞中，低浓度磷离子短时间影响 为促进作用，而高浓度时对STC．1 mRNA的影响都是极显著抑制作用；低浓度长时 间影响下，磷离子对STC．1 mRNA表达水平为抑制作用。 而对于钙离子，过高浓度5000／amol／L处理时对STC．1 mRNA的影响都是抑制 作用；长时间48 h钙离子处理时四组浓度对STC．1 mRNA表达水平也都为抑制作用； 12 h和24 h处理时，100 I．tmol／L、500 gmol／L和1000 I-tmol／L浓度钙离子对STC．1 mRNA表达水平有促进作用。 3．钙、磷对奶牛RTECs中STC．1蛋白表达的影响 同上把细胞分组培养，分别在6 h、12 h、24 h、48 h提取各组的总蛋白，利用 Western blotting方法检测钙、磷对STC一1蛋白表达的影响。 通过Western．blotting方法检测STC-1蛋白表达结果表明：短时间处理低浓度磷 离子对STC．1蛋白表达水平产生有促进作用；高浓度磷离子处理时，STC．1蛋白表 达水平被抑制；磷离子长时间48 h处理时，不论是低浓度和高浓度都对STC．1蛋白 表达水平产生抑制作用。 华中农业大学201l届硕士研究生学位论文不同浓度钙离子分别在6 华中农业大学201l届硕士研究生学位论文 不同浓度钙离子分别在6 h、12 h、24 h和48 h对STC．1蛋白的影响结果大致 相同，都是随着钙离子浓度的不断升高，STC-1蛋白表达量不断下降，且高浓度时 STC．1蛋白表达量与对照组相比明显减少。 关键词：奶牛、STC．1、钙磷代谢、肾小管上皮细胞 Ⅱ 钙磷对奶牛RTECs中STC．1 钙磷对奶牛RTECs中STC．1 mRNA和蛋白表达的影响 Abstract Calcium and phosphorus metabolism diseases is one of the major diseases of dairy COW．At present,such diseases poses serious threat to dak,y farms，seriously affecting the economic benefits of dairy farms．In OUr country and abroad,the studies of Calcium and phosphorus metabolism diseases focused on parathyroid hormone fPTH)，vitamin D， calcitonin，insulin-like growth factor(IGF一1)，osteocalcin(OC)and SO on in recent years． Stanniocalcin(STC)，is a glycoprotein hormone first discovered in bony fish,and then in the human,mouse and other mammals．It has been confirmed that STC-1 involved in regu