小鼠精原干细胞不同转染方法效率的比较.docxVIP

小鼠精原干细胞不同转染方法效率的比较 辛颖，张志强，安宁2），张涛“，张建峰刀，张智英°（西北农林科技大学动物科技学院，陕西杨凌712100; 陕西省畜牧技术推广总站，西安710016） 摘要本研究采用腺病毒感染、慢病毒感染、脂质体转染和电穿孔转化方法将含有绿色灾光蛋白 (GFP)的质粒转入经过差异贴壁法初步分离纯化的小鼠精原干细胞(SSCs)中转染48 h后通过流 式细胞仪检测GFP阳性细胞比例比较4种方法在体外转染精原干细胞的效率 结果显示，脂质体 转染效率最高仅为64% 能满足对精原干细胞进一步实验的要求；电穿孔法效率最高达到 25. 27%但转化后细胞大量死亡；腺病毒转染细胞的效率达到了 32. 4% ;慢病毒转染效率最高，达 到74.25%?因此 慢病毒转染法是体外转染小鼠精原干细胞的有效方法， 矢键词精原干细胞(SSCs);转染效率；不同转染方法比较 中图分类号Q223 Comparison of Different Methods for Spermatogonial Stem Cells Transfection Efficiencies XIN Ying n，ZHANG Zhi-Qiang n，AN Ning 2)，ZHANG Tao 0，ZHANG Jian^cng 2,，ZHANG Zhi-Ying 1,+ (College of Animal Science and Technology Northwest 4F University，Yangling 712100 ? Shaanxi，China； Shaanxi Animal Husbandry Technology Promotion Station、Xi an 710016 China) Abstract In this study，we compared different methods using adenovims lentivirus ‘ liposomes and electroporation for efficient transduction of purified spermatogonial stem cells ( SSCs) ? The expression of green fluorescence protein ( GFP) were assayed by flow cytometry after cell treatments for 48 hours1 The highest efficiency of liposome transfection was low as 8? 64% ? The electroporation reached 25. 27% with significant of cell death1 The maximum efficiency of adenoviral infection was observed to be 32. 4%，The lentivirus infection gave the best efficiency of 74. 25% ? Wc concluded that the most suitable method to transduce SSCs in vitro was to use lentivirus as the gene transfer vectors? Key words permatogonial stem cells( SSCs) ; transfection efficiency; different transfection methods 精原干细胞（spermatogonial stem cells （ SSCs） 是雄性动物体内向子代传达遗传信息的生殖干细 胞，具有高度的自我更新能力和分化潜能，对精原 干细胞进行的改造可以直接影响后代的遗传性 状精原干细胞在睾丸曲细精管的基膜上进行自我更 新和分化⑴?精原干细胞细胞核较大，呈圆形，有丰 富的线粒体和核糖体? 一般在出生6-8 0龄的小 鼠曲细精管生殖细胞悬液中，精原干细胞的比例 较高⑵?由于精原干细胞既可以自我更新成新的干 细胞，又可以不断增殖分化形成各阶段的生殖 细胞3因此它对于临床医学、遗传育种、生物信息 学等领域都具有广阔的的应用前景⑷? 研究精原干细胞的生物学特性，探索体外长期 培养和基因改造方法，运用冷冻保存和移植技术为 转基因动物生产提供了新的技术路线，1999年，宾 夕法尼亚大学Ogawa等⑸首次将仓鼠精原干细胞 收稿日期:2O13-O8-O8;接受日期:201349孚0 国家垂点基础研究发展计划项目(973计划，No?2011CBA01002) 联系人