152、HbA1c检测干扰因素.pdf

HbA1c检测干扰因素 检测方法介绍 干扰因素 HbA1c检测方法 电荷差异：离子交换法和电泳法 结构差异：亲和层析法 Ag-Ab反应：免疫法 离子交换色谱法 基于电荷差异。葡萄糖与血红蛋白β链N末端缬 氨酸（Val ）结合后导致糖化的Hb所带正电荷比 未糖化Hb少，与树脂的附着力小，可分别用不同 离子强度的缓冲液在不同时间将Hb从阳离子交换 柱中洗脱下来，再根据峰值下面积来计算HbA1c 占总Hb 的比例。由于Hb变异体会随HbA1c一起洗 脱而影响HbA1c值。 阳离子层析法原理示意图： +3 HbA1c +1 溶解液的流动 +5 固相(分析柱内的胶质） +5 +3 +1 +5 +3 +1 +3 HA 8180, HPLC, 爱科莱 国产，MQ2000PT ，上海惠中，LPLC 亲和层析原理 亲和色谱法是基于糖化和非糖化Hb结构不同进行分 析的。最早于1981年研发，与Hb 的α和β链的缬氨 酸（Val ）和赖氨酸（Lys ）连接的Glu均会与硼酸结 合形成可逆的复合物，未糖化Hb先被洗脱，再用山 梨醇分离复合物，并将全部糖化Hb洗脱出来。检测 结果是“总”糖化的Hb ，通过校准其结果与HPLC有良 好的相关性。该方法不受温度、尿毒症、HbF或 Schiff 碱的干扰。 Primus Hb9210，Trinity POCT 目前，在国内使用较多的有2种方法 POCT检测HbA1c，便携、快速，但精密度和准确度 相对其他方法要差。 一种是利用硼酸亲和原理在 颜色反射计上进行HbA1c快速 检测。HbA1c特异地与硼酸复 合物结合呈蓝色，而未糖化 Hb呈红色，通过两者光强度 的比例计算出HbA1c的百分浓 POCT, NycoCard 度。 另一种是基于硼酸亲和原理 和荧光淬灭技术。 POCT, Quo Test 免疫法 早在1978年就有论文介绍，但因技术原因，10年后才有 商业化产品。单克隆抗体技术的运用使该方法有了快速 发展，最早是英国Dako公司研制出识别Glu附着在Hb 的 β链N末端8个氨基酸抗原位点的单克隆抗体，用酶免 疫分析技术检测。该抗原与IFCC用于制备一级参考物质 的β链N末端6个氨基酸的短肽极为相似。 免疫法 该方法具有良好的精密度及与其他方法良好的相关性。 6glu→val 但当Hb发生第6位氨基酸变异[H