PI染色检测细胞周期试验步骤.docVIP

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2020-07-04 发布于天津
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PI染色检测细胞周期试验步骤.doc

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. 染色检测细胞周期：protocolPI）消化收集对数生长期细胞（加热处含EDTA1、收集细胞：胰酶（*6个），吸取旧10理后损失多的组宜多收集细胞保证细胞有0.5-2×（根据培养皿大小决定量，PBS培养基到一个新离心管里；少量常温也要收集到上述离PBSPBS洗可以保证消化效率）洗2次，清洗的然后胰酶消化心管内【检测凋亡才需收集旧培养基及清洗的PBS】；而不是成片脱落）显微镜下观察细胞呈单个，（注意一定要消化完全，后利用旧培养基中和胰酶；离心(1000r/300g 5min)收集细胞沉淀。 PBS清洗细胞两次。2、用预冷的重悬细胞沉淀，使细胞充分悬浮预冷的PBS3、固定细胞：用0.5ml乙醇终无水乙醇(1.2ml预冷的99.7%成单细胞，再将重悬细胞加入浓度70%)，吹打混匀以免细胞团聚，4℃固定至过夜。2H1.84、细胞染色：离心（1000r/300g）收集固定的细胞，以 5min才把细胞离mL的7000rpm(第一次实验时用PBS洗细胞一次，离心1再次获取细胞沉淀后加入但最后流式结果显示细胞没有碎)心下来，30避光染色lPI，最后加入400μ30minlRNaseA00μ于37℃水浴 ℃均可）min（常温或4P用染色剂（据样本数，500uL【有的试剂盒说明是：每个样本加入Triton 、A PI BS临时配好总量，其中50ug/ml、RNase 100ug/mL 染色30分钟】避光4）X-100 0.2% ℃ 、流式分析52 / 1 . 结果用细胞万个细胞，2-3以标准程序用流式细胞仪检测，一般计数去FL2-A显示，和使用分析。周期拟和软件ModFit分析时，FL2-w 除联体细胞。2 / 2