6.4HPLC-GC病理生理病理生理学学.pdf

高效液相色谱法和气相色谱法 色谱法 色谱法  是一种分离分析方法，系根据混合物中各组分的色谱行为 差异（如在吸附剂上的吸附能力的不同或在两相中的分配 系数的不同），将各组分从混合物中分离后再（在线或离 线）进行分析的方法，是分析混合物的最有力手段。 分配系数的微小差异→吸附能力的 微小差异；微小差异积累→较大 差异→吸附能力弱的组分先流出； 吸附能力强的组分后流出。 色谱法特点 （1）高灵敏度：最低检出浓度可达10-15 ~ 10-12 g/ml ； （2 ）高专属性：可有效分离样品中与待测组分结构相近的有 关物质，检测信号具有较高的专属性，可实现对待测组分 的选择性检测； （3）高效能与高速度：如HPLC或GC法通常可在20分钟内完 成药物的定量分析，或在30分钟内完成药物复方制剂中的 多组分同时定量分析； 广泛是复方制剂含量测定的首选方法； 色谱法分类 （1）依据分离原理：分为吸附色谱法、分配色谱法、 离子交换色谱法与分子排阻色谱法等； （2 ）依据分离方式：分为纸色谱法、薄层色谱法、 柱色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法等； 高效液相色谱法，气相色谱法在药物含量测定中最常 用。 系统适用性试验 色谱系统适用性试验  指用规定的对照品对色谱系统进行试验，应符合要求。如 达不到要求，可对色谱分离条件作适当的调整；  色谱系统适用性试验包括：理论板数、分离度、重复性和 拖尾因子等四个指标； 系统适用性试验 1、理论板数：用于评价色谱柱的分离效能，一般要求大于 3000 ； 2 、分离度：用于评价待测组分与相邻共存物或难分离物质 之间的分离程度，一般要求大于1.5 ； 3 、重复性：用于评价连续进样中，色谱系统响应值的重复 性能，一般要求连续进样5次，其峰面积相对标准偏差应 不大于2.0% ； 4 、拖尾因子 （T）：用于评价色谱峰的对称性。用峰高定量 时T应在0.95 ~ 1.05之间； 高效液相色谱法 高效液相色谱法 （high performance liquid chromatography ，HPLC）  系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱 柱进行分离测定的色谱方法。 注入的供试品由流动相带 入色谱柱，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由 记录仪、积分仪或数据处理系统记录色谱信号。 高效液相色谱仪 高效液相色谱仪工作流程示意图 高效液相色谱法  色谱柱：作为待测物分离的核心部件，其填充剂可分为极 性和非极性填充剂，其中以十八烷基硅烷键合硅胶为最常 用，组成反相色谱系统；  最常用的检测器为紫外检测器，包括二极管阵列检测器， 另外还有荧光检测器、蒸发光散射检测器、示差折光检测 器、电化学检测器和质谱检测器等；  关于流动相的选择，对于最常用的反相色谱系统的流动相 首选甲醇-水或乙腈-水系统。 气相色谱法 气相色谱法(gas chromatography ，GC)  采用气体流动相(载气)流经装有填充剂的色谱柱进行分离 测定的色谱方法。待测组分或其衍生物气化后，被载气带 入色谱柱进行分离，各组分先后进入检测器，由记录仪、 积分仪或数据处理系统记录色谱信号。  气相色谱法具有分离效能高、灵敏度高、样品用量少、分 析速度快等优点，但受样品蒸气压限制，适用于挥发性和 热稳定性的物质的分析。 气相色谱仪 气相色谱仪工