【临床微生物实验】_3细菌生化反应.pptVIP

细胞色素氧化酶参与的细菌呼吸途径中电子传递 1.氧化酶试验（Cytochrome oxidase test） （四）呼吸酶类试验 细胞色素C 细胞色素氧化酶 氧化的细胞色素C 二甲基对苯二胺（还原） 四甲基对苯二胺（还原） 无色 无色 二甲基对苯二胺（氧化） 四甲基对苯二胺（氧化） 蓝色 红色 应用：主要用于肠杆菌科细菌与假单胞菌的鉴别。 间接法 直接法 氧化酶试验（Cytochrome oxidase test）结果 试管法 玻片法 2.过氧化氢酶（触酶）试验( Catalase test) 应用：用于革兰阳性球菌的初步分群。 触酶 H2O2 H2O 出现气泡 + O2 3.硝酸盐还原试验(Nitrate reduction test)原理 对氨基苯磺酸 ?-萘胺 ?-萘胺偶氮苯磺酸 亚硝酸盐 * * 原理：有些菌可还原硝酸盐为亚硝酸盐或氨和氮等，前者可与?-萘胺和对氨基苯磺酸反应，生成红色偶氮化合物。硝酸盐还原试验就是测定还原过程中所产生的亚硝酸盐。 结果：立即出现红色为阳性；若没有红色出现，原因可能为：①真正阴性，可加锌粉于阴性反应物中，变成红色，为真正阴性；②或假阴性（真阳性），加锌粉不变色，因生成的亚硝酸盐被进一步还原成NH3、N2 等。 锌 硝酸盐 亚硝酸盐 硝酸盐没有被还原 硝酸盐还原试验(几种结果演示) 硝酸盐培养基 变红 不变红色 硝酸盐 亚硝酸盐 硝酸盐 氨+氮 +试剂（对氨基苯磺酸、 ?-萘胺） Zn 变红 不变红色（ ） 硝酸盐 亚硝酸盐 Zn 本试验在细菌鉴定中广泛应用。肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐；铜绿假单胞菌、嗜麦芽假单胞菌等非发酵菌可还原硝酸盐产生氮气。 + + - * * 1． DNA酶试验 在革兰阳性球菌中只有金黄色葡萄球菌产生DNA酶，在肠杆菌科中沙雷氏菌产生此酶。 （五）其他生化试验 * * DNA酶试验原理： DNA酶 长链DNA 寡核苷酸链（可被酸沉淀：白色） （可溶于酸：透明） * 临床微生物学检验 Laboratory Science of Clinical Microbiology 概念：不同细菌所具有的酶系统各不相同，对营养物质的利用能力各异，它们在代谢过程中所产生的代谢产物也不同，利用生物化学方法直接或间接检测细菌的代谢产物，从而鉴别细菌的反应称之为细菌生化反应。 学习目标： 掌握每个生化试验原理及结果观察！ * * 细菌的生物化学鉴定技术 生化反应分类 碳水化合物的代谢试验 蛋白质和氨基酸的代谢试验 碳源和氮源利用试验 呼吸酶类试验 其他生化试验 * * 细菌的生物化学鉴定技术 （一）碳水化合物的代谢试验 1. 糖（苷、醇）类发酵试验 作用：是鉴定细菌最主要和最基本的试验，特别对肠杆菌科细菌的鉴定尤为重要 * * 原理： 酶 不分解（－） 糖（苷、醇） 产酸不产气（＋） 产酸产气 ＋ 常用糖（苷、醇）类底物： 单糖： 葡萄糖、果糖、半乳糖等 双糖： 乳糖、蔗糖、麦芽糖等 多糖： 淀粉、糊精、肝糖等 醇类： 甘露醇、卫矛醇、山梨醇等 苷类：七叶苷、水杨素等 常用指示剂及颜色变化 pH域 　 　酸色 碱色 酚红 6.8--8.4 黄 红 溴麝香草酚蓝 6.0--7.6 黄 蓝 溴甲酚紫 5.2--6.8 黄 紫 甲基红 4.2--6.2 红 黄 中性红 6.8--8.0 红 黄 * * 指示剂：溴甲酚紫 酸性：黄色 碱性：紫色 指示剂：酚红 酸性：黄色 碱性：红色 结果： * * 2．氧化―发酵试验（O/F试验） 作用：主要用于肠杆菌科细菌与非发酵菌的鉴 别，前者均为发酵型，而后