微生物与基因重点项目工程.docVIP

第十章 微生物和基因工程 基因工程（genetic engineering）或重组DNA技术(recombinant DNA technology) 是指对遗传信息分子操作和施工，即把分离到或合成基因经过改造，插入载体中，导入宿主细胞内，使其扩增和表示，从而取得大量基因产物，或令生物表现出新性状。基因工程这个术语能够用来表示特定基因操作，也可泛指它所包含技术系统，其关键是构建重组体DNA技术。所以，基因工程和重组DNA技术有时也就成为同义词。 基因工程是在现代生物学、化学和化学工程学和其它数理科学基础上产生和发展起来，并有赖于微生物学理论和技术发展和利用，微生物在基因工程兴起和发展过程中起着不可替换作用。基因工程出现是本世纪生物科学含有划时代意义巨大事件，它使得生物科学取得迅猛发展，并带动了生物技术产业兴起。它出现标志着人类已经能够根据自己意愿进行多种基因操作，大规模生产基因产物，而且去设计和创建新基因、新蛋白质和新生物物种，这也是当今新技术革命关键组成部分。 第一节 基因工程概述 一、基因工程发展历史 基因工程是在本世纪70年代初开始出现。三项关键技术建立为基因工程奠定了基础，这三项技术是：DNA特异切割、DNA分子克隆和DNA快速测序。 早在50年代，阿尔伯（Arber）试验室就已发觉大肠杆菌能够限制侵染噬菌体，60年代末进而证实大肠杆菌细胞内存在修饰–限制系统，即给宿主本身DNA打上甲基化标识并切割入侵噬菌体DNA。1970年史密斯（Smith）等人从流感嗜血杆菌（Hemophilus influenzae）中分离出特异切割DNA限制酶。第二年，内森斯（Nathans）等人用该酶切割猴病毒SV40 DNA，最先绘制出DNA限制图谱（restriction map）。1973年史密斯和内森斯提出修饰–限制酶命名法。限制性核酸内切酶可用以在特定位点切割DNA，限制酶发觉使分离基因成为可能。为表彰上述科学家在发觉和使用限制酶中功绩，1978年诺贝尔医学奖被授予阿尔伯、内森斯和史密斯。 1973年，科恩（Cohen）和博耶（Boyer）等将pSC101质粒作为载体和R质粒四环素和卡那霉素抗性基因相融合，并将重组体DNA转化大肠杆菌，首次实现了DNA分子克隆。 1975年桑格（Sanger）试验室建立了酶法快速测定DNA序列技术。1977年吉尔伯特（Gilbert）试验室又建立了化学测定DNA序列技术。分子克隆和测序方法建立，使重组DNA技术系统得以产生。1980年诺贝尔化学奖被授予伯格、吉尔伯特和桑格，以肯定她们在发展DNA重组和测序技术中贡献。 1977年板仓（Itakura）和博耶用人工合成生长激素释放抑制素（Somatostatin, SMT）基因构建表示载体，并在大肠杆菌细胞内表示成功，得到第一个基因工程产品。1982年，在建立转基因植物和转基因动物技术上均取得重大突破。借助土壤农杆菌Ti质粒可将外源基因导入双子叶植物细胞内并发生整合，从而使植株取得新遗传性状。同年经过基因工程方法把大鼠生长激素基因注射到小鼠受精卵雄核中，然后移植到母鼠子宫内，由此培育出巨型小鼠。仅仅时间，基因工程在实践中快速成熟，日趋完善。 二、基因工程基础过程 生物遗传性状是由基因（即一段DNA分子序列）所编码遗传信息决定。基因工程操作首先要取得基因，才能在体外用酶进行“剪切”和“拼接”，然后插入由病毒、质粒或染色体DNA片段构建成载体，并将重组体DNA转入微生物或动、植物细胞，使其复制（无性繁殖），由此取得基因克隆（clone，无性繁殖系意思）。基因还可经过DNA聚合酶链式反应（PCR）在体外进行扩增，借助合成寡核苷酸在体外对基因进行定位诱变和改造。克隆基因需要进行判定或测序。控制合适条件，使转入基因在细胞内得到表示，即能产生出大家所需要产品，或使生物体取得新性状。这种取得新功效微生物称为“工程菌”，新类型动、植物分别称为“工程动物”和“工程植物”，或“转基因动物”和“转基因植物”。基因工程操作过程大致可归纳为以下关键步骤： ①分离或合成基因； ②经过体外重组将基因插入载体； ③将重组DNA导入细胞； ④扩增克隆基因； ⑤筛选重组体克隆； ⑥对克隆基因进行判定或测序； ⑦控制外源基因表示； ⑧得到基因产物或转基因动物、转基因植物。上述步骤可用图10-1来表示。 ? 图10-1 基因工程基础操作过程示意图 三、微生物学和基因工程关系 微生物和微生物学在基因工程产生和发展中占据了十分关键地位，能够说一切基因工程操作全部离不开微生物。从以下六个方面能够说明： ①基因工程所用克隆载体关键是用病毒、噬菌体和质粒改造而成； ②基因工程所用千余种工具酶绝大多数是从微生物中分离纯化得到； ③微生物细胞是基因克隆宿主，即使植物基因工程和动物基因工程也要先构建穿梭