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纤连蛋白在腭板发育过程中的作用 摘 要 目的: 腭裂是一种发病率较高的先天性疾病，在新生儿中的发病率为1：500～1000。但 目前腭裂的发病机制仍不清楚。腭板的大部分间质细胞起源于神经嵴细胞。神经嵴细胞 可以合成分泌纤连蛋白，纤连蛋白在生物学过程发挥多种功能，包括细胞的迁移、增殖、 分化、融合、粘附和胚胎发育等。神经嵴细胞条件性敲除纤连蛋白，小鼠胚胎发生腭裂。 但在腭板发育过程中，神经嵴细胞的纤连蛋白如何调节腭板发育的机制并不清楚。因此， 本课题通过特异性敲除神经嵴细胞中的纤连蛋白来研究纤连蛋白在腭发育和腭裂形成 中的重要作用机制。 方法 将: Fnflox/+;Wnt1-Cre2 小鼠与Fnflox/flox;RosamTmG/mTmG 小鼠进行合笼交配，收集同母 小鼠胚胎E13.5-E18.5 头部组织。采用PCR 技术鉴定小鼠基因型，区分对照组和突变组。 实验方法包括：（1）收集同母小鼠胚胎头部组织样本进行脱水、石蜡包埋和冠状切片， H E Alcianblue 2 Edu1 进行 ＆ ＆ 染色。（ ）将不同时期孕母鼠腹腔注射 小时后处死并收 集胚胎。（3）收集同母小鼠胚胎和新生小鼠进行骨骼染色。（4）取同母小鼠胚胎的头部 组织样本的冠状石蜡切片，用Runx2 等抗体进行免疫组化染色。（5）取同母小鼠胚胎的 头部组织样本的冠状石蜡切片，用Gli1等探针进行原位杂交实验。 结果：（1）E13.5 突变组胚胎腭板与对照组类似，在舌头两侧向下生长。E15.5 后，突变 组胚胎腭板抬升延迟，形成腭裂。（2）突变组胚胎腭板间质细胞增殖率降低，提示纤连 3 蛋白可能通过调节神经嵴细胞的增殖从而影响腭板的生长发育。（ ）突变组胚胎在出生 前后腭骨有不同程度发育缺陷。（4）突变组胚胎的腭板间质细胞分化为成骨细胞的能力 明显降低，意味着纤连蛋白可能通过调节腭板神经嵴细胞向成骨细胞的分化，从而影响 5 Gli1 Ptach1 Bmp4 Fgf10 4 硬腭的形成。（ ）突变组胚胎 、 、 和 这 个探针在腭板表达较 对照组明显降低，意味着纤连蛋白可能通过调节Shh信号传导从而影响腭的发育。 结论： 1. 神经嵴细胞中的纤连蛋白参与腭突发育； 2. 神经嵴细胞中的纤连蛋白可能参与调节腭突间质细胞的增殖和分化； 3. 神经嵴细胞中的纤连蛋白可能通过调节及整合Shh、Bmp、Fgf 信号通路从而调控腭 的发育。 III 纤连蛋白在腭板发育过程中的作用 关键字：纤连蛋白，腭裂，Fgf10 信号通路，Bmp4 信号通路，Shh信号通路 IV TheRoleofFibronectinduringPalateDevelopment Abstract Objective:Abnormalpalatogenesiscausecleftpalate,acommonbirthdefectinhumans. However,littleisknownaboutthepathogenesisofcleftpalate.Palatalshelvesarecomposed oftheepitheliumandunderliningmesenchymemainlyderivedfromneuralcrestcells. Previously,mousegeneticalstudieshaveshownthatepithelial-mesenchymalinteractionis importantforthepalatalshelfoutgrowth.WeaimtoinvestigatehowFibronectin,anessential