细胞融合与单克隆抗体精选文档.ppt

3.1 细胞融合 (cell fusion) 动物细胞融合基本过程 动物单个细胞的获得 组织的获得 组织的消化 诱导细胞融合形成杂种细胞 筛选，培养 3.1 细胞融合 (cell fusion) 3.1 细胞融合 (cell fusion) 定义 : 在离体条件下用人工的方法把不同种的细胞通过无 性方式融合成一个杂合细胞的技术。 3.1 细胞融合 (cell fusion) 3.1.1 细胞融合的发展历史 自发”细胞融合现象： ? 1838 年 Muller ? 1858 年 Virchow ? 1873 年 Luginbuhl ? 1875 年 Lange 多核的肿瘤细胞 正常组织、发炎组织及肿 瘤组织 —— 多核细胞 天花病人 —— 多核体血细胞 蛙类血液细胞发生合并 “ 3.1 细胞融合 (cell fusion) 3.1 细胞融合 (cell fusion) 3.1 细胞融合 (cell fusion) 重要事件 ? 1962 年 ,( 日 ) 冈田善雄 仙台病毒促细胞融合 ? 70 年代 ,( 华裔加籍 ) 高国楠 PEG 促植物原生 质体的融合 ? 80 年代，电融合 3.1 细胞融合 (cell fusion) 植物细胞融合： ? 1972 年（美） P.S.Carlson —— 杂种烟草 现代植物细胞融合的开始 ? 1978 年（德）梅歇尔斯 ——“ pomoto ” 3.1 细胞融合 (cell fusion) Pomoto “ ” 3.1 细胞融合 (cell fusion) 3.1.2 植物原生质体培养与细胞融合 (Protoplast and Cell fusion) 植物原生质体培养 植物细胞融合 3.1 细胞融合 (cell fusion) 3.1.3 动物细胞融合 动物细胞融合是研究细 胞遗传信息转移，基因 在染色体上的定位以及 创造新细胞株的有效途 径。 3.1 细胞融合 (cell fusion) 肿 瘤 细 胞 与 树 突 状 细 胞 的 融 合 3.1 细胞融合 (cell fusion) 1978 年 ( 瑞士 ) 埃勒门斯 ( 美国 ) 柯路斯 人纤维肉瘤细胞与小鼠畸胎瘤细胞融合 3.1 细胞融合 (cell fusion) 3.1 细胞融合 (cell fusion) 3.1.4 细胞融合的诱导 诱导融合的方法 : ? 物理法 : 电场刺激 激光 显微操作 ? 化学法 : 聚乙二醇 (PEG) 结合高 pH 、 高钙离子法 ? 生物法 : 仙台病毒 3.1 细胞融合 (cell fusion) 不同细胞融合的条件及其主要应用 来 源 动物细胞 前处理 不需 脱壁 脱壁 融合方法 主要应用 仙台病毒、 PEG 、 生 产 单 克 隆 电融合 抗体 PEG 、电融合 创 造 植 物 新 品种 高产优质新 菌种 植物细胞 微生物细胞 PEG 3.1 细胞融合 (cell fusion) 仙台病毒诱导 ? 仙台病毒 (Sendal virus) 也称日本血凝病毒 HVJ ，属粘病毒副流感类群，是 RNA 病 毒，多型颗粒状，易在小鼠中蔓延。 3.1 细胞融合 (cell fusion) 融合的可能机制： 病毒被膜含有糖蛋白，其表面还分布有许多具有神经氨酸 酶和凝血活性的突起，神经氨酸酶可降解细胞膜上的糖蛋 白，使细胞膜局部凝集，再通过膜上蛋白质分子的重新分 布，使膜中的脂类分子重排，而打开质膜，导致细胞融合。 3.1 细胞融合 (cell fusion) 融合过程： 1. 病毒颗粒附着细胞膜上起搭桥作用，使细胞 粘着成堆，在4℃冰浴中细胞紧密靠近，但不 发生融合。 2. 37 ℃温浴后，粘结部位的细胞膜破坏，形成 通道，细胞质流通、融汇。 3. 病毒颗粒进入细胞质，此时两个细胞合并、 变圆，完成融合，全过程约 15 ～ 30