【国自然】控内胚层组织器官发育的分子机制研究.docxVIP

项目名称： 调控内胚层安排器官发育的分子机制研讨 首席科学家： 罗凌飞 西南大学 起止年限： 2009.1至2013.8 依托部分： 教育部 重庆市科委 一、研讨内容 在本项目拟展开的研讨作业中，咱们将运用斑马鱼、非洲爪蟾、小鼠等形式动物和胚胎干细胞研讨体系，以肝脏和胰腺这两个重要的内胚层器官为首要研讨方针，辅以肠道的研讨，沿着从内胚层细胞到内胚层器官前体细胞的命运预订、到前体细胞的分解和老练功用细胞的构成、到器官的形状建成、功用发挥、和受损再生的动态接连进程，全面深化地研讨在内胚层安排器官特别是肝脏和胰腺的发育和再生进程中发挥重要功用的因子、信号途径和表观遗传安稳性的效果机制，并说明其间或许存在的时刻、空间网络相关。依照本项目拟设置的三个课题，具有研讨内容如下： 课题一：调控肝脏和肠道发育的分子机理研讨 斑马鱼体节构成前期预订的肝脏和肠道前体细胞在内胚层中的细胞谱系定位。1）可用于准承认位和分选预订的肝脏、肠道前体细胞的转基因斑马鱼的树立；2）4－6体节时期预订的肝脏和肠道前体细胞在内胚层中的细胞谱系定位。 在斑马鱼预订的肝脏或肠道前体细胞中特异和差异表达基因的选择及其功用机制研讨。1）4－6体节时期斑马鱼预订的肝脏、肠道前体细胞分选，两者之间及其别离与原肠中期内胚层细胞差异表达基因的芯片选择；2）差异表达基因发挥功用的分子机理研讨。 肝细胞命运决议后调控肝脏发育基因的选择与功用研讨。1）肝脏发育不隔阂期的差异表达基因的芯片选择；2）差异表达基因的功用和效果机理研讨。 运用胚胎干细胞体系研讨肝前体及肝细胞体外分解的分子机理。1）胚胎干细胞向肝脏前体细胞分解进程中命运决议的分子机理；2）胚胎干细胞来历的肝脏前体细胞的基因表达特性剖析，影响其定向分解的要害基因的寻觅及效果机理研讨；3）胚胎干细胞来历的肝脏前体细胞的体外分解才能及分子机理研讨。 组蛋白H3的N端三甲基化表观遗传调控机制在由胚胎干细胞到肝细胞分解进程中的功用。1）肝干细胞的构成与分解中组蛋白H3 N端三甲基化与染色质构成的联系；2）肝细胞特异的组蛋白H3 N端三甲基化酶的克隆；3）H3 N端三甲基化在从胚胎干细胞到肝细胞分解进程中的表观遗传安稳性及功用的体系研讨；4）肝细胞特异性组蛋白H3 N端三甲基化酶在肝细胞构成与分解中的效果与分子机理。 表观遗传在斑马鱼内胚层器官发育的不同阶段的安稳性及其功用的体系研讨。1）在斑马鱼内胚层器官发育的不同阶段对H3K4Me3、H3K27Me3、H3K9/18Ac、H4K12Ac的表观遗传安稳性及功用的体系化研讨；2）选取具有代表性的表观遗传位点，研讨染色质上相应位点邻近基因在调控内胚层器官发育中的功用及分子机理。 具有肝脏发育缺点的斑马鱼骤变体及致变基因的功用机制研讨。1）具有肝脏发育缺点骤变体的表现型研讨；2）导致肝脏发育缺点的致变基因克隆及其调控肝脏发育的分子机理研讨。 NEMO/IKK的K63多泛素化在调控肝脏发育中的功用与分子机理。1）NEMO/IKK及其多泛素化在调控斑马鱼肝脏发育中的功用；2）NEMO/IKK多泛素化酶的承认及其在肝脏发育中的功用。 Wnt信号途径及其上游调控因子KLP在斑马鱼肝脏发育中的功用机制。1）Wnt信号途径调控肝脏发育的分子机理；2）KLP调控肝脏发育的分子机理。 课题二：调控胰腺发育的分子机理研讨 在斑马鱼预订的胰表里排泄前体细胞中差异表达基因的选择及其功用机制研讨。1）斑马鱼原肠中后期内胚层细胞、4－6体节时期预订的内、外排泄前体细胞及非预订的胰腺前体细胞的分选，四者差异表达基因的芯片选择；2）差异表达基因的表达形式、功用和效果机制研讨。 非洲爪蟾预订的胰腺内胚层细胞特异性调控因子的选择和功用机制研讨。1）非洲爪蟾囊胚晚期/原肠前期预订的胰腺内胚层细胞的细胞谱系剖析定位；2）基因芯片比较正常的预订胰腺内胚层细胞与BMS453处理过的内胚层细胞、RA处理过的内胚层细胞、高表达了Hex的内胚层细胞、高表达了VegT和β-catenin的爪蟾胚胎多能性前体细胞的基因表达图谱以选择出决议预订胰腺内胚层细胞的特异性内涵调控因子；3）对选择所得重要调控因子发挥功用的分子机理研讨。 非洲爪蟾胰腺特异性表达的新基因的选择及功用机制研讨。1）运用大规模全体原位杂交从非洲爪蟾胚胎及成体的胰腺cDNA文库中选择胰腺特异性表达的新基因；2）新基因调控胰腺发育的功用及分子机理研讨。 Hex特异性地诱导腹侧胰腺前体细胞增多的分子机理研讨。1）Hex在原肠胚期过量表达诱导巨大腹侧胰腺的细胞机制研讨；2）Hex的相互效果因子、在染色质上附着位点、下流调控基因的选择及其调控胰腺发育的分子机理研讨。 非洲爪蟾胚胎胰腺和肝脏的体外重建。1）在经过前期紫外线照耀构成的爪蟾belly piece中选择性地康复胰腺和肝脏构成的研讨