生物医学电镜技术与细胞及组织超微结构总论.docx

Biomedical Electron Microscopy andCell Tissue Ultrastructure 2013515 2013-5-15 2013-5-15 PAGE #, 2013-5-15 2013-5-15 PAGE #, 绪 论 电子显微镜(Electron Microscope , EM) 简称电镜，它是用电子束代替可见光的显微 装置，一种高放大、高分辨的大型精密仪器。 目前电镜已广泛应用于医学、生物学、农业、 工业、军事等多个领域。EM在光学显微镜 基础上使细胞学的概念更加完善，对疾病的 认识，特别是对发病机理的研究做出了巨大 贝献。 (一)、电镜技术发展简史 ⑴、Robert Hooke(1665) Leeuwenhoek( 1674)发现细胞； ⑵、19世纪30年代,Schleiden(l938) Schwann (1839)提 出细胞学说(cell theory)； ⑶、1932年，德国Knoll Ruska建造第一台电镜(Electron Microscope,EM, X 12);1933?1934年，电镜的性能已达 光镜的分辨率0?2um, X 10,000； 1938-1939，第一批商 品电岛向相，分桃承达100A； 由于受到样品制备技术的限制，20世纪50年代初* 电镜技术才开始运用于生物医学方面的研究。 (4)、细胞超微结构的分子细胞生物学的基础。 （二）、分辨率与形态研究的关系 1、分辨率（Resolution） 乂称分辩本领（Resolving power）,是将沸近两点清晰区分、辩认 的能力，用能被辨认的邻近两点的距离表示。\、 肉眼：在明视距离（25cm）时，为0.25mm； LM:可见光的平均波长为500nm, r= LM的极限分辨率为 0.25um; \ EM：电子波波长短，且波长随加速电压的增高而更短，日前较好 的电镜分辨率为0.2nm左右，比LM提高1000倍，比人眼提高100万1咅. （注）：①由于电镜存在各种像差（包括球差、像散等），限制了分辨率，不 能真正达到其波长的-半； ■ ②分辨率还受到许多因素的影响，如切片的厚度等，超薄切片较薄 时，分辨率可达1?2.5nm,切片较厚时，实际分辨率为5?10nm. 2013-5-15 2013-5-15 PAGE # 2013-5-15 2013-5-15 PAGE # 2013-5-15 2013-5-15 2、反差: 差;被观察物与其背景在亮度（黑百对比度）上有所不同，这种差别称为反 透射电镜的反差主要由样品对电字的散射产生。 差; 3、空放大不能提供更为清晰的图像放大，称为无效放大,4、不同分辨率的形态研究也称无效放大。\、一當I 3、 空放大 不能提供更为清晰的图像放大，称为无效放大, 4、 不同分辨率的形态研究 也称无效放大。 \ 、一 當I日的度遂单位是微米侦m）和纳米（「皿）出相互关系如下: 1 mm（毫米）=1 （XX） um（微米）= KT m（米） I呻（微米）=1 000 nm（纳米）=m（米） I nm（纳米）=I0M埃）二 IO9 m（米） 电値观聽 Irn Imn 100 u m 10m m lun ](rtniti lOiim ]nn 0. In? Uu_U_Lua J ]_L?l ! 1 丄 L 1 Li 1 丄 」1-U I L Lui 1 」 1 原于和分子 細胞器岫子 细的 訪物刎馳 功物卷官 不同分辨率的形态硏究 5、亚微结构与超微结构的概念及关系 亚显微结构(submicroscopic structure ): 介于细胞水平和大分子水平之间的结构；简称为 “亚微结构”或“亚细胞结构(subcellullar structure),也称“细微结构(fine structure) 超微结构(ultrastructure): 严格的讲，是指分子水平的结构，目前一般书刊 对亚显微结构利超微结构无严格的界限，往往将普通 光镜分辩界限以下的结构笼统称为超微结构。 （三）、基本原理、构造及电镜的类型 ?电镜的基本构造及原理 ①、电子束主要特点： a、 由电子组成，真空中直线前进，具波动 特性； b、 电子束受电力和磁力作用； c、 电了束照射样品时，能透过极薄样品, 得到透射电子，或产生二次电子，特征X射线, 背散射电子等。 2013-5-15 2013-5-15 2013-5-15 2013-5-15 ②、电镜的基本构造：以透射电镜 r电 照明系统］ （聚 栉 物 中间 投影 成像系统 真空系统 镜 镜 ,观察室 观察记录系统 照相机构 供屯系统 「机械获 I油扩散泉 真空管道.润门 、真空