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《普通微生物学实验》教学大纲 Lab Course in General Microbiology 一、实践课程基本信息 实习课程名称 普通微生物学实验 课程代码 CB126060 课程类别 ?通识课程/?√学科（专业）基础课程/?专业课/?专业拓展课程/?文化素质教育课程 学 分 1 学 时 16 先修课程 微生物学/生物化学 开课单位 生命科学学院 适用专业 植保专、园艺技术专、园艺（专升本）、农学、植物科学与技术、种子科学与工程（选修）、植物保护、烟草、环境科学、环境工程、农业资源与环境、药学（选修）、园艺、茶学 主要教学 资料 一、选用教材 《微生物学实验教程》咸洪泉，郭立忠，高等教育出版社，2010年。 《微生物学实验》沈萍，高等教育出版社，2007 年第四版。 二、参考书目 [1]《微生物学实验教程》钱存柔等，北京大学出版社，1999 年第一版。 [2]《微生物学实验指导》黄秀梨，高等教育出版社，2006 年第二版。 [3]《微生物学》李阜棣等，中国农业出版社，2006 年第六版。 [4]《微生物学教程》周德庆著，高等教育出版社，2002 年 5 月第二版。 二、教学目的 （一）知识目标：本实验课属于《微生物学》的实验课，通过课程掌握现代微生物学实验基本操作技能，加深对微生物的感性认识。 （二）能力目标：进行微生物学检测实验方案的设计、初步具备利用微生物学手段分析和解决有关实际问题和从事有关科学研究工作的能力。 （三）素质目标：培养学生独立思考、思维敏锐、勇于创新、严谨认真和团队合作的科学精神，培养学生根据实际情况发现问题、分析问题和解决问题的综合素质。 三、基本要求 （一）了解实验室的布置以及实验室的规则。 （二）理解微生物学理论课所学知识和实验基本原理。 （三）掌握显微镜的使用、常用的染色技术、无菌操作技术、消毒灭菌技术、培养基配制、菌种鉴定等实验操作技能。 四、实验内容 实验一 培养基的制作与灭菌技术（4学时） 1.实验目的：了解培养基配制的基本原则，掌握 PDA培养基（或高氏一号培养基或牛肉膏蛋白胨培养基）的配制方法。了解学习干热灭菌、高压蒸汽灭菌、紫外线灭菌和微孔滤膜除菌的原理和应用范围。 2.试剂和仪器设备 试剂：牛肉膏，蛋白胨，琼脂，可溶性淀粉，葡萄糖，蒸馏水， NaCl，MgSO4.7H2O FeSO4·7H2O，1mol/L NaOH，1mol/L HCl等。 仪器设备：培养基分装器、天平、高压蒸汽灭菌锅等。 3.实验内容 四种培养基的制作与高压蒸汽灭菌技术 实验二 微生物的染色与形态观察（4学时） 1.实验目的：使学生熟悉光学显微镜的构造及各部分功能，学习并掌握低倍镜、高倍镜、尤其是油镜的原理和使用方法，熟练掌握革兰氏染色法的原理及步骤。了解根霉、青霉、毛霉、曲霉等霉菌的形态特征，掌握四种霉菌的取材、染色方法和注意事项。 2.原理： （1）革兰氏染色原理是由于不同类型细菌的细胞壁组成成分和结构不同，导致染色后不同类型细菌呈现不同的颜色。 （2）霉菌有无隔膜，营养菌丝有无假根，无性繁殖或有性繁殖时形成的孢子种类及着生方式不同。 3.试剂和仪器设备 草酸铵结晶紫染液、革兰氏碘液、 95%乙醇、蕃红染液、乳酸石炭酸棉蓝溶液、显微 镜等。 4.实验步骤 （1）革兰氏染色：涂片→初染→媒染→乙醇脱色→复染→干燥并镜检 若研究工作中要确证未知菌的革兰氏反应时，则需同时用已知菌进行染色作为对照。 （2）霉菌染色： a:于洁净的载玻片中央，滴加一小滴乳酸石炭酸棉蓝溶液。 b:然后用接种针从菌落边缘挑取少许菌丝体置于其中，摊开，轻轻盖上盖玻片（注意勿出现气泡），置于显微镜下观察。 实验三 微生物的生理生化实验（4学时） 实验（一） 微生物对生物大分子的分解利用——淀粉水解试验（1 学时） 1. 实验目的 （1）证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。 （2）掌握进行微生物大分子水解试验的原理和方法。 2. 原理：微生物对大分子的淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用。胞外酶主要为水解酶，将大分子物质水解为分子量较小的化合物，使其能被运输至细胞内。如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和单糖；脂肪酶水解脂肪为甘油和脂肪酸；蛋白酶水解蛋白质为氨基酸等。 3. 试剂与仪器设备 固体淀粉培养基，碘液，无菌平板、培养箱等。、 4.实验步骤 （1）制平板，待冷却后分区 （2）无菌操作以点植的方式接入枯草芽孢杆菌和大肠杆菌 （3）将平板倒置在37℃温箱中培养24h （4）观察各种细菌的生长状况，用碘液检测是否有水解圈产生 实验（二） 酒精发酵（1 学时） 1. 实验目的：了解酒精发酵的原理