奥美沙坦通过延髓腹外侧区AT1受体减弱自发高血压大鼠血管紧张素Ⅱ引发的中枢性升压反应临床医学.docVIP

奥美沙坦通过延髓腹外侧区AT1受体减弱自发高血压大鼠血管紧张素Ⅱ引发的中枢性升压反应临床医学 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：奥美沙坦通过延髓腹外侧区AT1受体减弱自发高血压大鼠血管紧张素Ⅱ引发的中枢性升压反应临床医学 2 1 材料与方法 2 2 结 果 4 3 讨 论 5 文2：阻断肾素血管紧张素系统对糖尿病大鼠肾脏血管紧张素ⅡAT1受体的影响临床医学 6 1 材料和方法 7 2 结 果 9 3 讨 论 10 参考文摘引言： 12 原创性声明（模板） 13 文章致谢（模板） 14 正文 奥美沙坦通过延髓腹外侧区AT1受体减弱自发高血压大鼠血管紧张素Ⅱ引发的中枢性升压反应临床医学 文1：奥美沙坦通过延髓腹外侧区AT1受体减弱自发高血压大鼠血管紧张素Ⅱ引发的中枢性升压反应临床医学 延髓腹外侧头端区(RVLM区)是交感输出和血压调节的重要脑区，接受延髓以上心血管中枢和外周传入的多种心血管活动信息，起到维持交感紧张性和稳定血压的作用。RVLM区存在多种神经递质及其相应受体，其中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及其AT1受体在该区含量丰富〔1〕。AT1受体与AngⅡ结合兴奋该区血管运动神经元引起交感活动增加，血压升高。 因此，AT1受体在RVLM区血压调节中起到关键作用。近几年研究发现高血压动物模型和高血压患者的RVLM区AT1受体密度显著增加，神经元自发活动也增加〔2〕。猜测RVLM区高度表达的AT1受体在高血压的形成和维持中起到重要作用〔3，4〕。又有研究报道，自发性高血压大鼠(SHR)的RVLM区微量注入AT1受体拮抗剂氯沙坦能够减弱静注苯肾上腺素引起的升压反应〔5，6〕，表明氯沙坦可能通过阻断RVLM区AT1受体降低血压。本课题组曾研究发现奥美沙坦能够有效减弱RVLM区微量注射谷氨酸引起的升压反应。因此，设想长期口服奥美沙坦能够通过抑制脑干心血管中枢AT1受体表达，减弱RVLM区注射AngⅡ引发的升压反应。 1 材料与方法 药品和仪器 奥美沙坦(日本Sankyo公司)，AngⅡ(美国Sigma公司)，多道生理记录仪(日本Nihonkohden公司)，立体定位仪(日本Narishige公司)，微操纵仪、微量注射仪(日本Narishige公司)，微电极放大器示波仪(日本National公司) 动物 SHR 40只，WKY大鼠20只(均雄性，10～12 w龄，北京维通利华动物中心)。SHR随机分成对照组和奥美沙坦组。奥美沙坦组大鼠饮用水中加有奥美沙坦(30 mg·kg-1·d-1)。对照组和WKY组大鼠正常饮水。各组大鼠均喂养4 w，每周测2次鼠尾动脉压。 一般手术处理 随机取SHR、奥美沙坦、WKY组大鼠各10只，乌拉坦( g/kg)腹腔麻醉。行气管插管和股动脉、股静脉插管，动脉导管连接记录平均动脉压(MAP)及心率(HR)。静脉补充20 %氨基甲酸乙酯(1 g/kg)维持麻醉。大鼠取俯卧位，头部固定于脑立体定位仪上，沿中线切开颅顶至背正中皮肤，去除部分颅骨、硬脑膜及小脑，充分暴露延髓背面。通过电热毯使肛温维持在37℃左右。 RVLM定位和给药 充分暴露延髓后，根据Paxinos和Watson鼠脑解剖图谱定位RVLM(以延髓闩部为 参考 点，RVLM在头端～ mm，中线旁开～ mm，延髓背侧表面下～ mm处)。将3根外径25～35 μm的注射微电极安装在注射用的微操纵仪上，尖端放置到RVLM区，经微量注射仪分别向三组大鼠单侧RVLM微量注射AngⅡ(100 pmol/50 nl)，注药速度为 nmol/min，观察注药前后大鼠MAP、HR的变化。实验结束后，2%偶氮蓝染剂 μl注入到显微注射部位，经左心室依次快速灌流生理盐水150 ml和4 %多聚甲醛溶液250 ml，灌注完毕迅速取脑并放置于4%多聚甲醛溶液中。用冰冻切片机将延髓作50 μm的冠状切片，中性红染色，在显微镜下寻找染点，根据Paxinos 和Watson鼠脑解剖图谱验证注射部位。 AngⅡ和定位染剂均用人工脑脊液配制。 测定RVLM内AT1受体mRNA水平 标本留置：取SHR、奥美沙坦、WKY组大鼠各10只，将其断头处死。对照Paxinos和Watson图谱取RVLM区脑组织，液氮速冻。 总RNA 提取：取200 mg脑组织，按Trizol (Invitrogen公司，美国)试剂盒说明书操作。用754 紫外分光光度计测定RNA含量。 RTPCR定量：取5 μl RNA经逆转录合成单链cDNA，取2 μl逆转录反应产物，94℃预变性1 min，94℃ 30 s，57℃ 30 s，72℃ 1 min ，30个循环后72℃延伸4 min 。取扩增产物8 μl，琼脂