石杉碱甲对老年大鼠腹部手术术后认知功能的影响.docVIP

石杉碱甲对老年大鼠腹部手术术后认知功能的影响 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：石杉碱甲对老年大鼠腹部手术术后认知功能的影响 1 1 材料与方法 2 2 结 果 3 3 讨 论 4 文2：依托咪酯对老年大鼠认知功能的影响 6 E组32±3 9 L组28±4 9 N组30±2 9 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 12 文章致谢（模板） 13 正文 石杉碱甲对老年大鼠腹部手术术后认知功能的影响 文1：石杉碱甲对老年大鼠腹部手术术后认知功能的影响 术后认知功能障碍(POCD)现在临床上广泛关注，老年人由于机体退行性变导致术后早期POCD的发生率大大增加，但其发生机制不甚清楚。脑内胆碱能系统在高级动物的学习记忆中起着重要作用〔1〕，但在POCD发生机制中的作用并不清楚。我们选择反应胆碱能神经的胆碱乙酰转移酶(ChAT)作为观察指标，旨在研究其与POCD发生 发展 的关系，探讨POCD的发生机制。另一方面，目前对POCD预防和 治疗 的有效性研究较少，为探讨对POCD的治疗策略，我们对脾切除术后大鼠POCD进行药物干预研究。以往研究表明石杉碱甲(Huperzine A,Hup A)具有很好的抗衰老和改善学习记忆功能作用〔2〕，本文从神经生 理学 和组织细胞学两方面研究该药对大鼠脾切除POCD的影响。 1 材料与方法 药物与试剂 石杉碱甲(河南竹林众生制药公司)，氯胺酮(福建古田药业公司),山羊抗ChAT多克隆抗体(Cemicon) 动物分组及模型制备 20月龄雄性Wistar大鼠(甘肃中医学院实验动物中心提供)经筛选剔除体重过大或过轻及在水中不游动的，共选出动物32只，体重500～550 g。按体重分级，随机分成4组：对照组,麻醉组,手术组，石杉碱甲组(n=8)。其中石杉碱甲组给石杉碱甲灌胃， mg·kg-1·d-1，溶于生理盐水中，连续灌3 w，对照组、麻醉组、手术组均按体重给与同容量的生理盐水灌胃3 w，3 w后手术组和石杉碱甲组在氯胺酮腹腔注射(25 mg/kg)麻醉下行脾切除手术;麻醉组仅给与氯胺酮麻醉，不行手术;对照组仅腹腔注射同容量的生理盐水。 学习、记忆功能的行为学测试 通过Morris水迷宫测试,将圆池内壁和平台漆成黑色，将其分为4个象限，平台置于第4象限没入水下约2 cm，选择一个象限的固定位置作为大鼠入水点，通过自动图像拍摄系统记录游泳轨迹，入水至找到平台为潜伏期,其总行程为游泳距离〔3〕。术前学习5 d，每天测试4次，取其平均值，术后1、3、7 d分别进行测试，并于术后7 d撤掉平台，记录60 s内大鼠在每个象限的停滞时间和在每个象限游泳的距离。 免疫组化染色 灌注和切片 大鼠行为学观察结束后，氯胺酮(25 mg/kg)腹腔麻醉动物，暴露心脏，以%生理盐水经升主动脉灌注冲洗后，灌注4%多聚甲醛()900 ml，持续2 h后取脑，将脑置于20%蔗糖的PBS溶液中浸置24～48 h (4℃)，冰冻冠状连续切片(厚度30 μm)，海马组织每5张取1张。 免疫组化染色步骤 切片置于 % Triton中浸30 min，PBS液洗3次，每次15 min;在稀释浓度为1∶2 000的山羊抗ChAT多克隆抗体中孵育72 h(4℃); PBS液漂洗后在生物素标记二抗(1∶100)中,室温下孵育1 h;辣根过氧化物酶标记链霉卵白素(1∶100)中,室温下孵育1 h;二氨基联苯氨(DAB)反应液中成色,室温下10～20 min;常规明胶裱片、脱水、DPX封片。为了 计算 ChAT细胞数目，采用标准网格的技术方法，在100倍的光镜下做ChAT细胞计数，以“500×400 μm”为单位，结果取3个视野的平均值。 统计学方法 计量资料以x±s表示，用统计软件，组间比较采用单因素方差分析。 2 结 果 水迷宫测试结果 术后1 d 麻醉组、手术组的逃避潜伏期和游泳距离延长，与对照组相比均有统计学意义(P);术后3 d仅手术组，石杉碱甲组与对照组比较有统计学意义(P)，且数值达高峰;术后7 d 手术组与对照组比较有差异(P),但差距已明显缩小;术后石杉碱甲组与手术组比较均有差异(P)。石杉碱甲组术前的逃避潜伏期和游泳路程较对照组有明显差异(P)，见表1。与对照组(%)、麻醉组(%)、石杉碱甲组(%)比较，术后7 d在60 s内手术组(%)的平台象限停滞时间百分比减小(P)，与对照组(%)、麻醉组(%)、石杉碱甲组(%)比较，术后7 d在60 s内手术组(%)的平台象限游泳距离占总游泳距离百分比减小(P)。这些结果说明脾切除术后大鼠在水迷宫测试中的空间认知能力受到损害，单次使用氯胺酮仅引起极短期的认知减退，而石杉碱甲组减弱了脾切