《发酵工程原理》课件第二章 微生物菌种制备.pptxVIP

第二章 微生物菌种制备原理与技术;本章内容;发酵工程是以微生物的生命活动为中心的 ； 微生物的生物学性状和发酵条件决定了其相应产物的生成； 工业上用的微生物称为工业微生物，工业生产上常用的微生物主要是细菌、放线菌、酵母菌和霉菌； 由于发酵工程本身的发展以及基因工程正在进入发酵过程，病毒、藻类等其它微生物也正在逐步地变为工业生产菌。 ;微生物细胞工厂;;;细胞工厂的构建;细胞工厂的构建;一、常用的工业微生物;一、常用的工业微生物 ;一、常用的工业微生物;一、常用的工业微生物;一、常用的工业微生物; 5、未培养微生物;菌种的保藏;在一定时间内使菌种不死、不变、不乱;要尽可能多的采用各种不同的手段进行保藏，以免因某种方法的失败而导致菌种的丧失。;创造不利于菌种生长的一切条件，使其代谢处于休眠状态。;菌种保藏方法;20;斜面保藏;国际重要菌种保藏机构;中国菌种保藏单位;24;25;二、发酵微生物生理学;;葡萄糖 ;乳酸;30;;丙酮酸羧化支路（回补途径）;由丙酮酸合成草酰乙酸 (1);+ CO2;磷酸烯醇式丙酮酸在磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶的催化下形成草酰乙酸。;;糖类脂类氨基酸和核苷酸之间的代谢联系;38;代谢调节;三、发酵工业菌种筛选;三、发酵工业菌种分离筛选; 1. 菌种选择的总趋势; ※2. 菌种选择的要求;2. 菌种选择的要求（续）;（二）分离筛选原理与技术;1、 筛选的两种指导思想 ;2、 分离筛选工作在实际中应用的几个方面;3、新种分离与筛选的步骤 ; 根据目的菌株及其产物特点分 ?? 选择性分离方法 随机分离方法 (定向筛选←选择压力) (用筛选方案- 检测系统进行间接分离） ?富集培养 ? 菌种纯化 ? 复筛; 菌种纯化 初步工艺条件摸索 再复筛 生产性能测试 较优菌株1-3株 保藏及进一步做生产试验 某些必要试验和 或作为育种的出发菌株 毒性试验等 ;(1)、含微生物样品的采集;（2）、样品的预??理 ;（3）、分离方法的选择 ; A、选择性分离原理和技术;2、选择性分离技术 富集培养;B、随机分离原理与技术;抗生素产生菌的筛选：正筛选;生长因子产生菌的筛选;氨基酸产生菌的筛选 ;放线菌的分离：以产链霉素菌种的分离为例（从退化菌种中筛选） ;真菌的分离筛选：以啤酒酵母的分离为例;四、发酵工业菌种改良;发酵工程的基本思路：为了实现某种工业目的(生产某种产品或降解有毒物质)，从自然界中筛选微生物并通过遗传手段改善其工业性能。;菌种选育改良的具体目标; 发酵工业菌种改良方法;出发菌株的选择;（二）、诱变育种方案设计;2、诱变剂的种类和选择;各种化学诱变剂常用的剂量和处理时间;3、突变的诱发;4、筛选;B、营养缺陷型的筛选方法;逐个检出法：负筛选;※(三）诱变育种应考虑的因素;2、复合诱变剂的使用 复合处理可以将两种或多种诱变剂分先后或同时使用，也可用同一诱变剂重复使用。 诱变剂复合处理的效果往往好于单独处理。 ;3、诱变剂剂量的选择;初筛：诱变后→稀释→涂布平板→培养→挑单个菌落到斜面→培养→将斜面上的菌落逐个接种到摇瓶→振荡培养→测抗生素效价→ 超过对照效价10%以上的菌种，进行复筛。 复筛：过程与初筛基本相同，不同的是一般将斜面上的单个菌落接种到三个摇瓶中，得出平均效价。复筛可进行1～3次。 由此筛选出的高产稳定菌种还要经过小型甚至中型试验，才能用到发酵生产中。;传统菌种改造技术的缺陷;菌种改造的新技术;代谢工程的定义;代谢工程发展基础;;代谢工程策略;代谢工程策略;;设计策略：正向(Constructive)代谢工程;正向代谢工程：重新分配中心途径代谢流;设计策略：反向(Inverse)代谢工程;反向代谢工程：基因组测序发现新靶点;设计策略：进化(Evolutionary)代谢工程;代谢工程设计;1，改变代谢途径;（1）加速限速反应;;（2）改变分支代谢途径流向;;;2，转移或构建新的代谢途径;Pyruvate;3，扩展代谢途径;综合设计策略：1,3-丙二醇;作业;第四节 微生物原生质体育种与基因组改组育种;原生质体的概念;