人慢性牙周炎牙龈组织巨噬细胞中S100钙结合蛋白A8的表达分析.docVIP

人慢性牙周炎牙龈组织巨噬细胞中S100钙结合蛋白A8的表达分析 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：人慢性牙周炎牙龈组织巨噬细胞中S100钙结合蛋白A8的表达分析 1 1、资料与方法 2 2、结 果 4 3、讨 论 5 文2：人结肠癌组织中RUNX3的表达意义 8 1材料和方法 8 1:maker；2:癌组织；3:癌旁正常组织. 10 参考文摘引言： 11 原创性声明（模板） 12 文章致谢（模板） 12 正文 人慢性牙周炎牙龈组织巨噬细胞中S100钙结合蛋白A8的表达分析 文1：人慢性牙周炎牙龈组织巨噬细胞中S100钙结合蛋白A8的表达分析 S100钙结合蛋白A8(S100 calciumbinding protein A8， S100A8)是S100蛋白家族的重要成员之一，主要由两个不同螺旋-环-螺旋(helix-loop-helix)配基手型(EF-hand，EF手型)组成的低分子量( ku)钙结合蛋白。S100A8通过对中性粒细胞的趋化作用、激活炎性细胞和炎性因子的产生、介导细胞内炎症信号转导等途径在炎症的发生、发展中发挥调节作用[1]。S100A8蛋白可特异性地表达于内皮细胞、表皮细胞及髓系细胞，因此又称为髓细胞相关蛋白-8(myeloid-related protein-8，MRP-8)，其功能取决于机体在特定炎症环境中分泌的介质及参与其识别的受体等[2]。S100A8在通常情况下可通过钙离子依赖性方式与S100A9形成S100A8100A9异源性二聚体发挥其生物功能[3]。研究表明，在生理情况下S100A8100A9无炎症活性，但在脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)等炎性因子的刺激下能诱导其炎症活性[4]。虽然异源性二聚体形式是钙卫蛋白最常见存在的形式，但其单体S100A8或S100A9也可独立存在并各自发挥其生物学功能[3]。在慢性牙周炎的发展过程中，细菌及其相应的代谢产物能够刺激巨噬细胞(macrophages， m?)活化，导致活化的m?分泌大量的促炎因子，在宿主免疫反应中发挥重要作用[4]。CD68是分布于细胞表面的分子量为110 ku的跨膜糖蛋白，在单核细胞表面较少，但向巨噬细胞转化后表达CD68，因此CD68是最常用于标记巨噬细胞的表面标记物[5，6]。以往研究主要聚集于钙卫蛋白二聚体的作用，而关于钙卫蛋白单体的研究报道较少。我们通过免疫荧光双染色(double immunofluorescence，DIF)，观察每组不同炎症程度慢性牙周炎牙龈组织标本中CD68-S100A8双阳性细胞的表达情况，探讨CD68-S100A8双阳性细胞在慢性牙周炎中的作用。 1、资料与方法 一般资料 2018年7月—2018年12月在中山市人民医院牙周科和口腔颌面外科门诊部就诊的自愿接受本研究的60例受试者，年龄16～65岁，其中男26例，平均年龄(±)岁;女34例，平均年龄(±)岁，患有糖尿病及其他系统性疾病者需排除。临床牙周炎患者选择的标准依据1999年美国牙周病学会公布的牙周病新分类指南[7]。实验符合人体试验委员会制定的伦理学标准并获得批准，所有受试者均签署知情同意书。 ①正常对照组20例(16～45岁):牙龈指数(gingival index，GI)=0，探诊深度(probing depth，PD)≤3 mm， X线片显示无牙槽骨吸收(图1A);②轻度牙周炎组20例(24～60岁):取自因需要接受临床牙冠延长术者，GI=1，PD≤4 mm，临床附着丧失(clinical attachment loss， CAL)为1～2 mm，X线片显示牙槽骨吸收≤根长1/3(图1B);③重度牙周炎组20例(31～65岁):取自无法保留或预后差的需拔牙的重度牙周炎患者，GI=3，PD6 mm，CAL≥5 mm，X线片显示牙槽骨吸收根长1/2，甚至达到根长的2/3，牙齿松动Ⅲ度(图1C)。各组间受试者年龄、性别无统计学差异。 图1各组X线影像 实验方法 牙龈组织标本于4%多聚甲醛溶液中固定时间48 h以上，随后脱水、石蜡包埋，制成5μm厚颊舌向牙龈组织连续切片用于后续染色。 -伊红染色法(hematoxylin-eositaining，HE) 在光学显微镜下对牙龈组织进行观察。由2名病理医师进行盲法观察，参照Huang等[8]的炎症程度评分标准对牙龈组织的炎症细胞浸润情况进行评分，取平均值。0分:无炎症细胞浸润;1分:轻度，牙龈组织中局部见炎症细胞呈小灶状浸润;2分:中度，牙龈组织中见灶状及片状浸润的炎症细胞;3分:重度，牙龈组织中可见弥漫性浸润的炎症细胞。 S100A8-CD68双阳性细胞免疫荧光双染色