脑梗死患者骨保护素基因多态性与血浆中骨保护素水平之间的关系分析.docVIP

脑梗死患者骨保护素基因多态性与血浆中骨保护素水平之间的关系分析 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：脑梗死患者骨保护素基因多态性与血浆中骨保护素水平之间的关系分析 1 1、对象与方法 2 2、结果 4 3、讨论 5 文2：ABCA1基因多态性与血浆载脂蛋白A1水平的关系 7 1对象和方法 7 参考文摘引言： 11 原创性声明（模板） 12 文章致谢（模板） 12 正文 脑梗死患者骨保护素基因多态性与血浆中骨保护素水平之间的关系分析 文1：脑梗死患者骨保护素基因多态性与血浆中骨保护素水平之间的关系分析 脑梗死是一种由环境和遗传因素共同作用而引起的多基因疾病[1]。近年来，随着分子遗传学技术的进步，脑梗死发病相关基因遗传学研究也日益受到关注，寻找脑梗死相关致病基因已经成为当前研究的热点[2]。骨保护素(OPG)是肿瘤坏死因子(TNF)超受体家族中的一种糖蛋白，同时也是TNF相关凋亡诱导配体的受体，是凋亡的有效激活因子[3]。王猛猛等[4]研究表明，OPG基因多态性与LAA型脑卒中易感性有关。CAO等[5]研究显示，OPG基因位点多态性与脑梗死的发生以及严重程度有关[6]，但是OPG基因多态性是否与血浆中OPG水平相关尚不明确。本研究旨在探讨OPG基因多态性与血浆中OPG水平的关系，为进一步探讨OPG与LAA型脑梗死间的相关性提供参考依据。 1、对象与方法 研究对象 选取2016年11月—2018年11月我院神经内科住院的LAA型脑梗死患者221例(LAA组)，患者均符合第四届全国脑血管病会议修订的诊断标准，经颅脑CT或MRI确诊为脑梗死，并行头颈部血管检查，包括颅脑磁共振血管造影(MRA)和(或)头颈部CT血管造影(CTA)或全脑血管造影(DSA)确诊为颈内动脉或大脑中动脉区脑梗死。按照经典TOAST病因分型确定为LAA型脑梗死[7]。入选标准:责任血管动脉粥样硬化性狭窄程度≥50%，患者均于发病72h内入院。排除标准:①由心源性栓塞、小血管型梗死、不明原因及其他原因导致的脑梗死，如动脉夹层、大动脉炎、血液病、烟雾病、药物等。②病情危重者;③近期使用了免疫抑制药，有明显的心、肝、肾功能不全以及急慢性感染、恶性肿瘤的患者;④近半个月服用了影响凝血功能的药物或者既往有脑梗死病史者。选择同期于我院体检中心查体的健康者115例为对照组。入选标准:既往无脑梗死病史，颅脑CT或MRI检查示无急性期脑梗死;血管检査无明显颅内外动脉粥样硬化及狭窄的证据。本研究经青岛大学附属医院伦理委员会批准(QDDXYXYFSXY-2014-005)，所有研究对象及家属均了解研究目的并签署知情同意书。 样本采集和实验室检测 清晨空腹采集所有受试者的前臂静脉血8mL，4mL血液以3000min离心10min分离血浆，将血浆转移到聚丙烯管中，于-70℃冻存待测OPG浓度。血浆中OPG浓度采用人OPGELISA试剂盒(RDSystem公司，美国)测定。检测间和检测内变异系数分别为%和%。另外4mL静脉血以3000min离心15min后分离血清，采用全自动生化分析仪(北京泰林东方商贸有限公司)检测受试者血清中高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、总胆固醇(TC)、葡萄糖(GLU)、三酰甘油(TG)水平。 基因扩增 采用标准方法提取受检者外周血白细胞基因组DNA，应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测OPG基因多态性。以GenBank为参考基因序列，由北京圣工股份有限公司设计并且合成引物。使用美国AppliedBiosystems2720PCR扩增仪，TaKaRaLATaqwithGC缓冲液反应试剂进行PCR扩增。总反应体系25μL，包括DNA模板4μL，LATaq酶1μL，及2×缓冲液μL，dNTPMixture4μL，10μmol/L上下游引物各μL，加双蒸水至25μL。PCR扩增条件为94℃预变性5min;然后94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸30s，扩增30个循环;最后72℃延伸7min。 基因型鉴定 取PCR扩增产物4μL，加入限制性内切酶AseⅠ(新英格兰生物学实验室，北京)1μL和缓冲液μL，加双蒸水至8μL，于37℃恒温水浴1h，然后进行电泳。使用Tanon4200SF全自动荧光/化学发光成像分析系统(上海天能科技有限公司)观察PCR扩增情况并拍照。 统计分析 采用软件对所有数据进行统计学分析。以Hardy-Weinberg平衡检验样本的群体代表性。计量资料以xˉ±s表示，计数资料以率表示。计量资料组间比较采用t检验。以χ2检验或Fisher确切概率法进行组间基因型或等位基因分布频率的比较，